| 中 文 摘 要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 符 号 说 明 | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-27页 |
| ·甜味蛋白的研究进展 | 第12-19页 |
| ·甜味剂发展的简介 | 第12-13页 |
| ·甜味剂的种类 | 第13-15页 |
| ·几种甜味蛋白的研究现状 | 第15-17页 |
| ·基因工程技术在甜味蛋白研究中的应用 | 第17-19页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统研究进展 | 第19-26页 |
| ·巴斯德毕赤酵母表达系统简介 | 第19-20页 |
| ·表达载体的发展 | 第20-22页 |
| ·受体菌的发展 | 第22页 |
| ·外源蛋白在巴斯德毕赤酵母中高效表达的策略 | 第22-25页 |
| ·总结和展望 | 第25-26页 |
| ·论文的新颖性 | 第26-27页 |
| 第二章 植物甜蛋白(Brazzein)重组菌株的构建 | 第27-34页 |
| ·序列的设计及研究思路 | 第27-28页 |
| ·基因序列的设计 | 第27页 |
| ·研究思路 | 第27-28页 |
| ·材料和试验方法 | 第28-34页 |
| ·材料 | 第28-29页 |
| ·试验方法 | 第29-32页 |
| ·结果与讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 目的蛋白的诱导表达与分析 | 第34-39页 |
| ·试验材料 | 第34-35页 |
| ·试剂 | 第34页 |
| ·仪器设备 | 第34-35页 |
| ·试验方法 | 第35-37页 |
| ·植物甜蛋白(Brazzein)在高拷贝的菌株中的诱导表达 | 第35页 |
| ·Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳 | 第35-37页 |
| ·结果与讨论 | 第37-39页 |
| 第四章 发酵条件的优化 | 第39-55页 |
| ·试验材料 | 第39-40页 |
| ·菌种 | 第39页 |
| ·试剂 | 第39页 |
| ·主要仪器设备 | 第39-40页 |
| ·试验和测定方法 | 第40-42页 |
| ·细胞干湿重与OD600值关系的测定 | 第40页 |
| ·基础盐的原始配方 | 第40页 |
| ·底物中甘油浓度的测定 | 第40-41页 |
| ·发酵液总蛋白的测定 | 第41页 |
| ·发酵条件的优化 | 第41-42页 |
| ·Brazzein的小试发酵 | 第42页 |
| ·结果与讨论 | 第42-55页 |
| ·细胞干湿重与OD600值的关系 | 第42-43页 |
| ·甘油的消耗 | 第43-44页 |
| ·发酵条件的优化 | 第44-53页 |
| ·Brazzein的小试发酵 | 第53-55页 |
| 第五章 目标蛋白的初步分离 | 第55-66页 |
| ·实验材料 | 第55-56页 |
| ·试剂 | 第55页 |
| ·仪器 | 第55-56页 |
| ·实验方法 | 第56-66页 |
| ·沉淀法 | 第56页 |
| ·树脂吸附法 | 第56-66页 |
| 第六章 结 论 | 第66-67页 |
| ·实验进展 | 第66页 |
| ·存在的问题 | 第66页 |
| ·原因和解决办法 | 第66-67页 |
| 参 考 文 献 | 第67-71页 |
| 附录一 培养基 | 第71-74页 |
| 附录二 缓冲液 | 第74-77页 |
| 附录三 离子交换柱特征表 | 第77-79页 |
| 附录四 Sephadex G50层析图谱 | 第79-80页 |
| 附录五 Sephadex G25层析图谱 | 第80-81页 |
| 附录六 树脂SP-FF层析图谱 | 第81-82页 |
| 致 谢 | 第82-83页 |
| 攻读硕士学位期间发表文章 | 第83页 |