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根癌农杆菌介导的花生遗传转化的研究

致谢第1-4页
目录第4-6页
中文摘要第6-7页
Abstract第7-9页
本文所用缩写说明第9-10页
1 、 前言第10-22页
   ·、 花生遗传育种及遗传工程的研究进展第10-15页
     ·、 花生抗虫、耐除草剂基因工程对花生育种研究的意义第10-11页
     ·、 花生遗传育种研究进展第11-12页
     ·、 花生遗传转化的研究进展第12-15页
   ·、 植物遗传转化辅助方法的研究进展第15-16页
   ·、 转基因植株的鉴定第16-20页
     ·、 植物基因组DNA的提取第16-17页
     ·、 质粒DNA的提取第17-19页
     ·、 PCR检测第19-20页
     ·、 PCR-Southern杂交检测第20页
   ·、 本实验的研究目的及意义第20-22页
2 、 不同花生品种植株离体再生的比较及花生高频离体再生体系的完善第22-29页
   ·、 材料第22页
   ·、 实验方法第22-23页
     ·、 70%酒精和0.1%升汞不同处理时间的灭菌效果及其对种子萌发的影响第22页
     ·、 MS和1/2MS培养基对不同品种种子萌发的影响第22页
     ·、 4种培养基对不同品种叶段芽诱导的影响第22页
     ·、 活性炭对花生再生苗生根的影响第22-23页
     ·、 培养条件第23页
     ·、 再生苗移栽培养第23页
   ·、 实验结果与讨论第23-28页
     ·、 酒精和升汞的灭菌效果及其对种子萌发的影响第23-24页
     ·、 不同品种种子在2种培养基中的萌发第24-25页
     ·、 不同品种叶外段外植体芽的诱导第25-26页
     ·、 活性炭对花生再生苗生根的影响第26-27页
     ·、 花生再生苗的移栽第27-28页
   ·、 小结第28-29页
3 、 农杆菌介导的花生遗传转化的研究第29-50页
   ·、 实验材料第29-31页
     ·、 花生品种第29页
     ·、 农杆菌菌株第29页
     ·、 培养基第29页
     ·、 用于抗虫性实验的昆虫种类第29页
     ·、 昆虫饲料的配制第29-30页
     ·、 试剂配制:第30-31页
   ·、 实验方法:第31-38页
     ·、 外植体的获得及菌株的培养第31页
     ·、 花生叶段对抗生素Cb和Cef的敏感性试验第31-32页
     ·、 筛选剂PPT筛选时期对花生叶段转化的影响第32页
     ·、 3种不同方法提取质粒pCB302-3第32-33页
     ·、 外源基因的分子检测第33-34页
     ·、 PCR法标记探针第34-35页
     ·、 斑点杂交(标记探针的定量分析)第35-36页
     ·、 外源基因的Southern杂交检测第36-38页
     ·、 转基因植株后代的抗虫性分析第38页
     ·、 转基因植株后代(T_1代)的分子检测第38页
   ·、 实验结果与分析第38-47页
     ·、 花生叶段对抗生素和草丁膦的敏感性试验第38-40页
     ·、 三种方法提取的质粒DNA的琼脂糖凝胶电泳比较第40-41页
     ·、 三种方法提取的质粒DNA PCR特异性扩增结果比较第41页
     ·、 转化植株的PCR检测结果第41-42页
     ·、 探针标记电泳结果第42-43页
     ·、 斑点杂交(探针定量分析)结果第43页
     ·、 转化植株的Southern杂交分析结果第43-44页
     ·、 转基因植株的抗虫性分析第44-45页
     ·、 转基因后代(T_1代)植株的分子检测第45-47页
   ·、 讨论第47-50页
     ·、 质粒DNA的提取第47页
     ·、 PCR法生物素标记探针第47-48页
     ·、 Southern杂交第48-49页
     ·、 农杆菌介导的花生遗传转化第49-50页
4 、 负压和超声波辅助的农杆菌介导的花生遗传转化研究第50-56页
   ·、 材料、培养基及试剂的配制第50页
   ·、 实验方法第50-51页
     ·、 负压处理辅助花生遗传转化第50页
     ·、 超声波辅助农杆菌介导的转化(Sonication-assisted Agrobacterium-mediated transformation,SAAT)第50-51页
   ·、 实验结果与讨论第51-55页
     ·、 不同程度负压处理对外植体芽诱导的影响第51页
     ·、 不同辅助转化处理方式对转化的影响第51-52页
     ·、 超声波处理时间对花生外植体分化的影响第52-53页
     ·、 SAAT转化花生及若干因素的影响第53-54页
     ·、 转基因植株的PCR检测结果第54-55页
   ·、 小结第55-56页
参考文献第56-64页

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