| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 第一部分 引言与文献综述 | 第12-39页 |
| 1 甘蔗概况 | 第12-17页 |
| ·甘蔗的用途 | 第12-13页 |
| ·制糖 | 第12页 |
| ·生产酒精 | 第12-13页 |
| ·其他用途 | 第13页 |
| ·甘蔗的育种 | 第13-16页 |
| ·杂交育种 | 第13页 |
| ·生物技术育种 | 第13-16页 |
| ·甘蔗作为转基因受体的优越性 | 第16-17页 |
| 2 干旱与抗旱 | 第17-28页 |
| ·我国的干旱概况和蔗区的干旱情况 | 第17-18页 |
| ·干旱对植物的影响 | 第18页 |
| ·植物抗旱的形态结构特点 | 第18页 |
| ·植物抗旱的生物学原理 | 第18-23页 |
| ·渗透调节 | 第18-19页 |
| ·Lea蛋白保护 | 第19-20页 |
| ·可溶性糖保护 | 第20页 |
| ·水通道蛋白、脱水素调节 | 第20-21页 |
| ·光合作用调节 | 第21-22页 |
| ·抗氧化防御系统 | 第22页 |
| ·气孔行为 | 第22-23页 |
| ·植物抗旱相关基因研究进展 | 第23-28页 |
| ·脯氨酸(Proline)生物合成的相关基因 | 第23-24页 |
| ·甘露醇(mannitol)合成的相关基因 | 第24页 |
| ·甜菜碱(Glycinebetaine)生物合成的相关基因 | 第24-25页 |
| ·海藻糖(Trehalose)生物合成的相关基因 | 第25页 |
| ·果聚糖(Fructan)生物合成相关的基因 | 第25-26页 |
| ·肌醇甲酯(D-ononitol)生物合成相关基因 | 第26页 |
| ·多胺(Polyamine)生物合成相关基因 | 第26页 |
| ·胚胎后期发生丰富蛋白基因(Lea)或Lea相关基因 | 第26-27页 |
| ·编码转录因子的调节基因 | 第27页 |
| ·解毒酶和氧化胁迫相关酶基因 | 第27-28页 |
| 3 海藻糖概况 | 第28-38页 |
| ·海藻糖的理化性质 | 第28页 |
| ·海藻糖对生物的保护作用 | 第28-32页 |
| ·海藻糖对高等动植物细胞的保护作用 | 第29-30页 |
| ·海藻糖对生物膜系的保护作用 | 第30页 |
| ·海藻糖对DNA辐射损伤的保护作用 | 第30-31页 |
| ·海藻糖对蛋白质的稳定作用 | 第31页 |
| ·海澡糖对其它生物分子的保护 | 第31-32页 |
| ·海藻糖的抗逆分子机理 | 第32-33页 |
| ·“水替代”学说 | 第32-33页 |
| ·“玻璃态”学说 | 第33页 |
| ·海藻糖的生物合成 | 第33-36页 |
| ·通过磷酸化酶合成海藻糖 | 第33-34页 |
| ·通过海藻糖-6-磷酸合酶和-6-磷酸磷酸酯酶合成海藻糖 | 第33-34页 |
| ·通过海藻糖磷酸化酶合成海藻糖 | 第34页 |
| ·通过海藻糖合酶合成海藻糖 | 第34-35页 |
| ·以葡萄糖为底物合成海藻糖 | 第35页 |
| ·以麦芽糖为底物合成海藻糖 | 第35页 |
| ·通过糖基转移酶和淀粉酶合成海藻糖 | 第35页 |
| ·通过麦芽寡糖基海藻糖合酶和海藻糖水解酶合成海藻糖 | 第35-36页 |
| ·海藻糖的应用前景 | 第36页 |
| ·海藻糖合酶基因遗传转化的研究进展 | 第36-38页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第38-39页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第39-63页 |
| 1 材料与试剂 | 第39页 |
| ·质粒及菌种 | 第39页 |
| ·试剂 | 第39页 |
| 2 pCRBT植物表达载体的构建 | 第39-52页 |
| ·质粒载体的大量提取与纯化 | 第39-41页 |
| ·pCAMBIA3300的大量提取与纯化 | 第39-41页 |
| ·pBI121质粒的大量提取与纯化 | 第41页 |
| ·构建策略 | 第41-42页 |
| ·中间载体pCBI的获得 | 第42-46页 |
| ·酶切 | 第42页 |
| ·目的片段的回收 | 第42-43页 |
| ·回收片段的连接 | 第43页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第43-44页 |
| ·连接产物的转化 | 第44页 |
| ·重组质粒DNA的小量提取 | 第44-45页 |
| ·重组质粒pCBI的电泳分析 | 第45页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第45页 |
| ·重组菌pCBI的保存 | 第45-46页 |
| ·中间载体pCRBI的获得 | 第46-48页 |
| ·pRDT质粒的大量提取与纯化 | 第46页 |
| ·酶切 | 第46-47页 |
| ·目的片段的回收 | 第47页 |
| ·回收片段的连接 | 第47页 |
| ·连接产物的转化 | 第47页 |
| ·重组质粒DNA的小量提取 | 第47页 |
| ·重组质粒pCRBI的电泳分析 | 第47页 |
| ·重组质粒pCRBI的酶切鉴定 | 第47-48页 |
| ·重组菌pCRBI的保存 | 第48页 |
| ·植物表达载体pCRBT的获得 | 第48-52页 |
| ·pGC29质粒的提取 | 第48页 |
| ·酶切 | 第48-49页 |
| ·补平 | 第49-50页 |
| ·回收片段的连接 | 第50-51页 |
| ·连接产物的转化 | 第51页 |
| ·重组质粒DNA的小量提取 | 第51页 |
| ·重组质粒的电泳分析 | 第51页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第51页 |
| ·植物表达载体pCRBT的保存 | 第51-52页 |
| 3 植物表达载体转化农杆菌 | 第52-56页 |
| ·转化方法 | 第52页 |
| ·转化农杆菌的点杂交鉴定 | 第52-56页 |
| ·探针的制备 | 第52-53页 |
| ·海藻糖合酶基因目的片段的获得 | 第52-53页 |
| ·目的片段的回收 | 第53页 |
| ·探针的制备 | 第53页 |
| ·农杆菌质粒的提取 | 第53-54页 |
| ·DNA的固定 | 第54页 |
| ·预杂交与杂交 | 第54-55页 |
| ·洗膜与显色 | 第55-56页 |
| ·重组农杆菌的保存 | 第56页 |
| 4 干旱诱导启动子驱使下的海藻糖合酶基因遗传转化甘蔗 | 第56-63页 |
| ·甘蔗转化材料及农杆菌菌液的准备 | 第56-57页 |
| ·甘蔗培养基的成分 | 第56页 |
| ·外植体的处理 | 第56页 |
| ·农杆菌菌液的准备 | 第56-57页 |
| ·转化材料的预处理 | 第57页 |
| ·农杆菌菌液浸染愈伤组织及共培养 | 第57页 |
| ·筛选培养及甘蔗小植株的定植 | 第57页 |
| ·转化植株的检测 | 第57-63页 |
| ·植物总DNA的提取 | 第57-58页 |
| ·PCR检测 | 第58-59页 |
| ·转化植株的Southern杂交 | 第59-61页 |
| ·阳性植株总DNA的大量提取 | 第59-60页 |
| ·植物总DNA的浓度和纯度的检测 | 第60页 |
| ·植物总DNA的酶切反应 | 第60页 |
| ·酶切效果检测 | 第60-61页 |
| ·电泳 | 第61页 |
| ·Southern印迹转移、杂交 | 第61页 |
| ·转基因植株的形态观察及抗旱性鉴定 | 第61-63页 |
| ·转基因植株的形态观察 | 第61-62页 |
| ·转基因植株细胞质透性的测定 | 第62-63页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第63-78页 |
| 1 植物表达载体的构建 | 第63-69页 |
| ·中间载体pCBI的获得 | 第63-65页 |
| ·中间载体pCRBI的获得 | 第65-66页 |
| ·植物表达载体pCRBT的获得 | 第66-69页 |
| 2 植物表达载体导入农杆菌 | 第69页 |
| 3 农杆菌介导的甘蔗转化 | 第69-74页 |
| ·甘蔗胚性愈伤组织的诱导及分化成苗 | 第69-70页 |
| ·农杆菌菌液的浓度和浸染时间 | 第70页 |
| ·AS的使用 | 第70-71页 |
| ·不同基因型甘蔗转化的比较 | 第71页 |
| ·小植株的抗性筛选 | 第71-72页 |
| ·抗性植株的定植 | 第72-73页 |
| ·转化和筛选的程序 | 第73-74页 |
| 4 转基因植株的分子检测 | 第74-75页 |
| ·植物总DNA的提取 | 第74页 |
| ·转化植株的PCR检测 | 第74页 |
| ·转化植株的Southern Blotting检测 | 第74-75页 |
| 5 农杆菌介导遗传转化甘蔗产生PCR阳性植株的频率 | 第75-76页 |
| 6 转基因植株的形态观察及抗旱性测定 | 第76-78页 |
| ·转基因植株的形态观察 | 第76-77页 |
| ·转基因甘蔗的抗旱性测定 | 第77-78页 |
| 第四部分 结论 | 第78-79页 |
| 第五部分 讨论 | 第79-81页 |
| 1 关于干旱诱导启动子 | 第79页 |
| 2 关于海藻糖合酶基因 | 第79-80页 |
| 3 关于筛选 | 第80-81页 |
| 参与文献 | 第81-92页 |
| 缩写词(Abbreviation) | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93页 |
