| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 一、文献综述 | 第10-26页 |
| 1 苦丁茶冬青研究进展 | 第10-15页 |
| ·苦丁茶历史文献记载与原植物考证 | 第11页 |
| ·与苦丁茶相关的历史文献记载 | 第11页 |
| ·苦丁茶原植物 | 第11页 |
| ·苦丁茶冬青的化学成分及其药理作用 | 第11-15页 |
| ·苦丁茶冬青的主要化学成分 | 第11-12页 |
| ·苦丁茶冬青的药理作用 | 第12-15页 |
| ·对心血管系统的作用 | 第12-13页 |
| ·降血脂、血糖作用 | 第13-14页 |
| ·抗氧化作用 | 第14页 |
| ·其他作用 | 第14-15页 |
| ·苦丁茶冬青的开发与利用 | 第15页 |
| ·苦丁茶冬青混合饮料 | 第15页 |
| ·以苦丁茶冬青为主要材料的其他产品 | 第15页 |
| 2 分子标记技术 | 第15-17页 |
| ·分子标记技术的分类 | 第16-17页 |
| ·RFLP | 第16页 |
| ·RAPD | 第16-17页 |
| ·AFLP | 第17页 |
| ·SCAR | 第17页 |
| 3. 雌性异株植物的性别 | 第17-24页 |
| ·雌雄异株植物的性别决定机制 | 第18-19页 |
| ·性染色体决定型 | 第18页 |
| ·基因平衡决定型 | 第18-19页 |
| ·性别基因决定型 | 第19页 |
| ·植物性别鉴定方法归类 | 第19-24页 |
| ·外观形态学鉴别 | 第19-20页 |
| ·生理生化鉴别 | 第20页 |
| ·同工酶鉴别 | 第20-21页 |
| ·染色体组型鉴别 | 第21页 |
| ·分子标记鉴别 | 第21-24页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第24-25页 |
| 5 技术路线 | 第25-26页 |
| 二、与苦丁茶冬青性别相关的RAPD-SCAR标记的开发 | 第26-51页 |
| 1 苦丁茶冬青性别调查与基因组DNA的提取 | 第26-30页 |
| ·材料与方法 | 第26-28页 |
| ·材料 | 第26页 |
| ·主要化学试剂 | 第26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-28页 |
| ·苦丁茶冬青性别调查 | 第27页 |
| ·苦丁茶冬青基因组DNA的提取 | 第27页 |
| ·苦丁茶冬青基因组DNA质量检测 | 第27页 |
| ·苦丁茶冬青雌/雄DNA基因池的构建 | 第27-28页 |
| ·结果与分析 | 第28-30页 |
| ·苦丁茶冬青性别观测结果 | 第28页 |
| ·苦丁茶冬青基因组DNA质量检测 | 第28-30页 |
| ·苦丁茶冬青雌/雄基因池的构建 | 第30页 |
| 2 与性别相关的RAPD特异标记的筛选 | 第30-40页 |
| ·材料与方法 | 第30-33页 |
| ·试验材料 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30页 |
| ·主要仪器设备 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30-33页 |
| ·利用正交设计对苦丁茶冬青RAPD体系进行优化 | 第30页 |
| ·苦丁茶冬青RAPD-PCR扩增程序的优化 | 第30-31页 |
| ·RAPD分析有效引物的筛选 | 第31-33页 |
| ·在雌/雄DNA样品池间筛选有差异的引物 | 第33页 |
| ·用单样验证雌/雄DNA池间有差异的引物 | 第33页 |
| ·结果与分析 | 第33-40页 |
| ·RAPD-PCR实验条件正交设计结果直观分析与方差分析 | 第33-35页 |
| ·PCR各影响因素对RAPD-PCR反应的影响 | 第35-38页 |
| ·模板DNA用量对RAPD-PCR反应的影响 | 第35页 |
| ·Mg~(2+)浓度对RAPD-PCR反应的影响 | 第35-36页 |
| ·引物浓度量对RAPD-PCR反应的影响 | 第36页 |
| ·DNTPs浓度对RAPD-PCR反应的影响 | 第36-37页 |
| ·DNA Tag酶用量对RAPD-PCR反应的影响 | 第37-38页 |
| · | 第38-39页 |
| ·引物退火温度对RAPD-PCR反应的影响 | 第38页 |
| ·循环次数温度对RAPD-PCR反应的影响 | 第38-39页 |
| ·苦丁茶冬青RAPD雄性特异标记的获得 | 第39-40页 |
| 3 RAPD雄性特异标记转化为SCAR标记 | 第40-48页 |
| ·材料与方法 | 第40-42页 |
| ·试验材料 | 第40页 |
| ·主要试剂 | 第40页 |
| ·主要仪器设备 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-42页 |
| ·LB培养基的配制 | 第40-41页 |
| ·RAPD特异性条带的回收、克隆、转化与测序 | 第41-42页 |
| ·SCAR引物的设计与合成 | 第42页 |
| ·SCAR引物最佳退火温度 | 第42页 |
| ·SCAR引物对苦丁茶冬青进行批量检测 | 第42页 |
| ·结果与分析 | 第42-48页 |
| ·S164-900与S191-800克隆结果的检测 | 第42-43页 |
| ·S164-900特异片段测序结果 | 第43-44页 |
| ·S191-800特异片段测序结果 | 第44页 |
| ·SCAR引物的设计与合成 | 第44页 |
| ·SCAR引物最佳退火温度的测定 | 第44-47页 |
| ·SCAR标记对苦丁茶冬青性别的批量检测 | 第47-48页 |
| 4 讨论 | 第48-49页 |
| ·关于SCAR标记在苦丁茶冬青的品种选育中的意义 | 第48页 |
| ·关于植物性别表现多样性的问题 | 第48-49页 |
| ·关于SCAR标记的转化失败的问题 | 第49页 |
| ·关于SCAR标记准确率问题 | 第49页 |
| 5 结论 | 第49-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 附录1 苦丁茶冬青性别调查表 | 第55-57页 |
| 附录2 部分引物在雌/雄DNA池扩增的结果 | 第57-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
