| 目录 | 第1-6页 |
| 中文摘要 | 第6-7页 |
| 英文摘要 | 第7-8页 |
| 第一章 色氨酰tRNA合成酶的表达和纯化 | 第8-27页 |
| 第一部分 枯草杆菌色氨酰tRNA合成酶的表达和纯化 | 第8-15页 |
| 摘要 | 第8页 |
| 1 引言 | 第8-9页 |
| 2 材料与方法 | 第9-11页 |
| 2．1 材料 | 第9-10页 |
| 2．2 B．subtilisTrpRS的表达 | 第10页 |
| 2．3 细胞破碎和酶的纯化 | 第10页 |
| 2．4 SDS-PAGE电泳 | 第10页 |
| 2．5 蛋白质浓度的测定 | 第10-11页 |
| 2．6 模板DNA的制备和tRNATrp的体外转录 | 第11页 |
| 2．7 测定体外转录的tRNATrp色氨酰化活力 | 第11页 |
| 3 结果 | 第11-13页 |
| 3．1 B．subtilisTrpRS在大肠杆菌中的高表达和纯化 | 第11-13页 |
| 3．2 B．subtilisTrpRS的动力学常数测定 | 第13页 |
| 4 讨论 | 第13页 |
| 参考文献 | 第13-15页 |
| 第二部分 人色氨酰tRNA合成酶的克隆、表达和纯化 | 第15-27页 |
| 摘要 | 第15页 |
| 1 引言 | 第15-16页 |
| 2 材料与方法 | 第16-18页 |
| 2．1 质粒和菌株 | 第16页 |
| 2．2 酶和试剂 | 第16页 |
| 2．3 质粒构建 | 第16-17页 |
| 2．4 人色氨酰tRNA合成酶的表达 | 第17页 |
| 2．5 人色氨酰tRNA合成酶的纯化 | 第17页 |
| 2．6 RNA的制备 | 第17-18页 |
| 2．7 酶活测定 | 第18页 |
| 2．8 质谱分析 | 第18页 |
| 3 结果 | 第18-22页 |
| 3．1 质粒pET-24a（+）-HTrpRS的构建 | 第18-19页 |
| 3．2 人TrpRS-His6的表达和纯化 | 第19-20页 |
| 3．3 人TrpRS-His6和TrpRS的动力学常数 | 第20-21页 |
| 3．4 质谱分析 | 第21-22页 |
| 4 讨论 | 第22-24页 |
| 参考文献 | 第24-27页 |
| 第二章 tRNATrp的种属特异性氨酰化 | 第27-49页 |
| 摘要 | 第27页 |
| 1 引言 | 第27-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-31页 |
| 2．1 质粒和菌株 | 第29页 |
| 2．2 酶的纯化和酶活测定 | 第29-30页 |
| 2．3 RNA的制备 | 第30页 |
| 2．4 序列分析 | 第30-31页 |
| 3 结果 | 第31-41页 |
| 3．1 氨基酸接受茎、D茎和反密码茎中的12个不同碱基 | 第31-33页 |
| 3．2 人色氨酰tRNA合成酶的种属交叉氨酰化 | 第33-36页 |
| 3．3 枯草杆菌色氨酰tRNA合成酶的种属交叉氨酰化 | 第36页 |
| 3．4 色氨酰tRNA合成酶的序列分析 | 第36-39页 |
| 3．5 tRNATrp的序列分析 | 第39-41页 |
| 4 讨论 | 第41-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 第三章 碱基对G2:C71,G3:C70和G4:C69是tRNATrp有效氨酰化必须的个性元件 | 第49-71页 |
| 摘要 | 第49页 |
| 1 引言 | 第49-50页 |
| 2 材料与方法 | 第50-54页 |
| 2．1 质粒和菌株 | 第50-51页 |
| 2．2 酶的纯化和枯草杆菌色氨酰tRNA合成酶的固相化 | 第51页 |
| 2．3 随机库的构建 | 第51-52页 |
| 2．4 体外筛选 | 第52-53页 |
| 2．5 RNA的制备 | 第53页 |
| 2．6 色氨酰tRNA合成酶活力测定 | 第53-54页 |
| 3 结果 | 第54-63页 |
| 3．1 酶的纯化和枯草杆菌色氨酰tRNA合成酶的固相化 | 第54-55页 |
| 3．2 体外筛选 | 第55-56页 |
| 3．3 筛选得到的RNA的序列和二级结构 | 第56-58页 |
| 3．4三 个G:C碱基对在tRNATrp氨酰化中有重要作用 | 第58-63页 |
| 4 讨论 | 第63-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 第四章 枯草杆菌TrpRS与小螺旋DNA的紫外光定点交联 | 第71-81页 |
| 摘要 | 第71页 |
| 1 引言 | 第71-72页 |
| 2 材料与方法 | 第72-73页 |
| 2．1 材料 | 第72-73页 |
| 2．1．1 菌株和质粒 | 第72页 |
| 2．1．2 酶与化学试剂 | 第72页 |
| 2．1．3 小螺旋DNA的合成 | 第72页 |
| 2．1．4 紫外交联仪 | 第72-73页 |
| 2．2 方法 | 第73页 |
| 2．2．1 TrpRS的纯化、定量和氨酰化活力测定 | 第73页 |
| 2．2．2 紫外交联 | 第73页 |
| 3 结果 | 第73-76页 |
| 3．1 TrpRS的纯化 | 第73页 |
| 3．2 紫外交联 | 第73-74页 |
| 3．3 紫外光剂量对紫外光化学交联的影响 | 第74-75页 |
| 3．4 TrpRS浓度对紫外交联的影响 | 第75-76页 |
| 3．5 小螺旋DNA浓度对紫外交联的影响 | 第76页 |
| 4 讨论 | 第76-79页 |
| 参考文献 | 第79-81页 |
| 发表文章目录 | 第81-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
