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色氨酰tRNA合成酶与tRNA~(Trp)的相互识别

目录第1-6页
中文摘要第6-7页
英文摘要第7-8页
第一章 色氨酰tRNA合成酶的表达和纯化第8-27页
 第一部分 枯草杆菌色氨酰tRNA合成酶的表达和纯化第8-15页
  摘要第8页
  1 引言第8-9页
  2 材料与方法第9-11页
   2.1 材料第9-10页
   2.2 B.subtilisTrpRS的表达第10页
   2.3 细胞破碎和酶的纯化第10页
   2.4 SDS-PAGE电泳第10页
   2.5 蛋白质浓度的测定第10-11页
   2.6 模板DNA的制备和tRNATrp的体外转录第11页
   2.7 测定体外转录的tRNATrp色氨酰化活力第11页
  3 结果第11-13页
   3.1 B.subtilisTrpRS在大肠杆菌中的高表达和纯化第11-13页
   3.2 B.subtilisTrpRS的动力学常数测定第13页
  4 讨论第13页
  参考文献第13-15页
 第二部分 人色氨酰tRNA合成酶的克隆、表达和纯化第15-27页
  摘要第15页
  1 引言第15-16页
  2 材料与方法第16-18页
   2.1 质粒和菌株第16页
   2.2 酶和试剂第16页
   2.3 质粒构建第16-17页
   2.4 人色氨酰tRNA合成酶的表达第17页
   2.5 人色氨酰tRNA合成酶的纯化第17页
   2.6 RNA的制备第17-18页
   2.7 酶活测定第18页
   2.8 质谱分析第18页
  3 结果第18-22页
   3.1 质粒pET-24a(+)-HTrpRS的构建第18-19页
   3.2 人TrpRS-His6的表达和纯化第19-20页
   3.3 人TrpRS-His6和TrpRS的动力学常数第20-21页
   3.4 质谱分析第21-22页
  4 讨论第22-24页
  参考文献第24-27页
第二章 tRNATrp的种属特异性氨酰化第27-49页
 摘要第27页
 1 引言第27-29页
 2 材料与方法第29-31页
  2.1 质粒和菌株第29页
  2.2 酶的纯化和酶活测定第29-30页
  2.3 RNA的制备第30页
  2.4 序列分析第30-31页
 3 结果第31-41页
  3.1 氨基酸接受茎、D茎和反密码茎中的12个不同碱基第31-33页
  3.2 人色氨酰tRNA合成酶的种属交叉氨酰化第33-36页
  3.3 枯草杆菌色氨酰tRNA合成酶的种属交叉氨酰化第36页
  3.4 色氨酰tRNA合成酶的序列分析第36-39页
  3.5 tRNATrp的序列分析第39-41页
 4 讨论第41-44页
 参考文献第44-49页
第三章 碱基对G2:C71,G3:C70和G4:C69是tRNATrp有效氨酰化必须的个性元件第49-71页
 摘要第49页
 1 引言第49-50页
 2 材料与方法第50-54页
  2.1 质粒和菌株第50-51页
  2.2 酶的纯化和枯草杆菌色氨酰tRNA合成酶的固相化第51页
  2.3 随机库的构建第51-52页
  2.4 体外筛选第52-53页
  2.5 RNA的制备第53页
  2.6 色氨酰tRNA合成酶活力测定第53-54页
 3 结果第54-63页
  3.1 酶的纯化和枯草杆菌色氨酰tRNA合成酶的固相化第54-55页
  3.2 体外筛选第55-56页
  3.3 筛选得到的RNA的序列和二级结构第56-58页
  3.4三 个G:C碱基对在tRNATrp氨酰化中有重要作用第58-63页
 4 讨论第63-66页
 参考文献第66-71页
第四章 枯草杆菌TrpRS与小螺旋DNA的紫外光定点交联第71-81页
 摘要第71页
 1 引言第71-72页
 2 材料与方法第72-73页
  2.1 材料第72-73页
   2.1.1 菌株和质粒第72页
   2.1.2 酶与化学试剂第72页
   2.1.3 小螺旋DNA的合成第72页
   2.1.4 紫外交联仪第72-73页
  2.2 方法第73页
   2.2.1 TrpRS的纯化、定量和氨酰化活力测定第73页
   2.2.2 紫外交联第73页
 3 结果第73-76页
  3.1 TrpRS的纯化第73页
  3.2 紫外交联第73-74页
  3.3 紫外光剂量对紫外光化学交联的影响第74-75页
  3.4 TrpRS浓度对紫外交联的影响第75-76页
  3.5 小螺旋DNA浓度对紫外交联的影响第76页
 4 讨论第76-79页
 参考文献第79-81页
发表文章目录第81-83页
致谢第83页

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