| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-18页 |
| ·稻瘟病和稻瘟病菌概况 | 第10-13页 |
| ·稻瘟病菌的分类地位及其侵染循环过程 | 第10-11页 |
| ·稻瘟病菌致病相关基因研究进展 | 第11-13页 |
| ·稻瘟病菌分生孢子形态及产孢相关基因 | 第11-12页 |
| ·稻瘟病菌附着胞形成相关基因 | 第12-13页 |
| ·凝集素的概况 | 第13-15页 |
| ·真菌凝集素的研究现状 | 第13-14页 |
| ·真菌凝集素的生物学特性 | 第14页 |
| ·真菌凝集素的生物学活性 | 第14页 |
| ·真菌凝集素的应用 | 第14-15页 |
| ·纤维素酶的概况 | 第15-16页 |
| ·纤维素酶的特性 | 第15页 |
| ·纤维素酶的应用 | 第15-16页 |
| ·丝状真菌基因敲除技术研究进展 | 第16-17页 |
| ·基因敲除的概念 | 第16页 |
| ·基因敲除在丝状真菌研究中的应用 | 第16-17页 |
| ·研究基因的结构与功能 | 第16-17页 |
| ·改良工业生产菌株 | 第17页 |
| ·次生代谢产物合成途径改造 | 第17页 |
| ·本课题研究的目的和意义 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-30页 |
| ·试验材料 | 第18-19页 |
| ·供试菌株 | 第18页 |
| ·供试植物 | 第18页 |
| ·供试载体 | 第18页 |
| ·培养基 | 第18页 |
| ·生化试剂 | 第18-19页 |
| ·实验方法 | 第19-30页 |
| ·蛋白序列获得与分析 | 第19页 |
| ·稻瘟病菌基因组DNA 的提取及质量的检测 | 第19页 |
| ·DNA 琼脂糖电泳 | 第19页 |
| ·PCR 扩增 | 第19-20页 |
| ·PCR 产物的凝胶回收 | 第20页 |
| ·PCR 产物的TA 克隆 | 第20-21页 |
| ·E.coli DH5α感受态细胞的制备及转化 | 第21页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第21-22页 |
| ·质粒DNA 的酶切与连接 | 第22页 |
| ·三个基因敲除载体的构建 | 第22-24页 |
| ·MGG_06834.6 和MGG_03891.6 过量表达载体的构建 | 第24页 |
| ·稻瘟病菌原生质体的制备 | 第24-25页 |
| ·稻瘟病菌原生质体转化和转化子的验证 | 第25-26页 |
| ·稻瘟病菌菌丝Total RNA 的提取及检测 | 第26页 |
| ·RT-PCR 反转录 | 第26-27页 |
| ·稻瘟病菌突变体的表型观察 | 第27-30页 |
| ·菌落生长速度测定 | 第27页 |
| ·产孢量统计及孢子形态观察 | 第27-28页 |
| ·孢子萌发、附着胞形成及形态观察试验 | 第28页 |
| ·洋葱表皮内侵染结构的观察 | 第28页 |
| ·大麦离体接种试验 | 第28页 |
| ·水稻活体接种试验 | 第28-29页 |
| ·SDS 对突变体细胞完整性的影响试验 | 第29-30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-57页 |
| ·稻瘟病菌MGG_03356.6 的生物信息学分析和功能研究 | 第30-37页 |
| ·MGG_03356.6 的生物信息学分析 | 第30页 |
| ·MGG_03356.6 敲除载体的构建 | 第30页 |
| ·MGG_03356.6 敲除突变体的筛选与验证 | 第30-31页 |
| ·MGG_03356.6 敲除突变体的表型分析 | 第31-37页 |
| ·MGG_03356.6 缺失引起产孢量减少 | 第32-33页 |
| ·MGG_03356.6 缺失使稻瘟病菌菌丝生长稍微减慢 | 第33页 |
| ·MGG_03356.6 敲除突变体的孢子萌发及附着胞形成 | 第33-34页 |
| ·MGG_03356.6 的敲除突变体对大麦和水稻的致病性正常 | 第34-36页 |
| ·MGG_03356.6 缺失突变体对细胞完整性的影响 | 第36-37页 |
| ·稻瘟病菌MGG_06834.6 的生物信息学分析和功能研究 | 第37-47页 |
| ·MGG_06834.6 的生物信息学分析 | 第37-38页 |
| ·MGG_06834.6 敲除载体的构建 | 第38-39页 |
| ·MGG_06834.6 敲除突变体的筛选与验证 | 第39页 |
| ·MGG_06834.6 过量表达载体的构建 | 第39页 |
| ·MGG_06834.6 过量表达突变体的筛选与验证 | 第39-41页 |
| ·MGG_06834.6 敲除突变体和过量表达突变体的表型分析 | 第41-47页 |
| ·MGG_06834.6 过量表达引起产孢量减少 | 第41-42页 |
| ·MGG_06834.6 敲除或过量突变体的菌丝生长略慢 | 第42-43页 |
| ·MGG_06834.6 敲除与过量表达突变体的孢子萌发及附着胞形成 | 第43-44页 |
| ·MGG_06834.6 的过量表达突变体的致病性减弱 | 第44-46页 |
| ·MGG_06834.6 缺失突变体对细胞完整性的影响 | 第46-47页 |
| ·稻瘟病菌MGG_03891.6 的生物信息学分析和功能研究 | 第47-57页 |
| ·MGG_03891.6 的生物信息学分析 | 第47-48页 |
| ·MGG_03891.6 敲除载体的构建 | 第48页 |
| ·MGG_03891.6 敲除突变体的筛选与验证 | 第48-49页 |
| ·MGG_03891.6 过量表达载体的构建 | 第49-50页 |
| ·MGG_03891.6 过量表达突变体的筛选与验证 | 第50页 |
| ·MGG_03891.6 敲除突变体和过量表达突变体的表型分析 | 第50-57页 |
| ·MGG_03891.6 过量表达引起产孢量减少 | 第50-52页 |
| ·MGG_03891.6 敲除或过量突变体的菌丝生长正常 | 第52页 |
| ·MGG_03891.6 敲除与过量表达突变体的孢子萌发及附着胞形成 | 第52-53页 |
| ·MGG_03891.6 的过量表达突变体的致病性减弱 | 第53-55页 |
| ·MGG_03891.6 缺失突变体对细胞完整性的影响 | 第55-57页 |
| 4 小结与讨论 | 第57-60页 |
| ·三个基因敲除和过量表达突变体的表型小结 | 第57页 |
| ·MGG_03356.6 基因敲除后不影响致病性 | 第57-58页 |
| ·MGG_06834.6 基因功能冗余 | 第58页 |
| ·MGG_06834.6 基因可能是细胞完整性调控因子 | 第58页 |
| ·MGG_06834.6 和 MGG_03891.6 基因的过量表达影响了致病性 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 附录1 | 第66-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
