| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-23页 |
| ·十字花科黑腐病菌及其致病机理研究进展 | 第12-15页 |
| ·十字花科黑腐病菌 | 第12-13页 |
| ·十字花科黑腐病菌的致病因子 | 第13-15页 |
| ·细菌的锌代谢平衡机制及调控研究进展 | 第15-22页 |
| ·细菌的锌离子排放系统及其调控 | 第17-18页 |
| ·细菌的锌离子吸收系统及其调控 | 第18-19页 |
| ·锌吸收调控蛋白(Zur)的研究进展 | 第19-22页 |
| ·十字花科黑腐病菌8004的zur基因 | 第22页 |
| ·本工作的目的与内容 | 第22-23页 |
| 第二章 材料与方法 | 第23-47页 |
| ·菌株和质粒 | 第23-24页 |
| ·常用抗生素和其它试剂 | 第24页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·溶液与缓冲液 | 第25-27页 |
| ·实验所用菌株的培养条件和保存方法 | 第27-28页 |
| ·常规PCR反应 | 第28-29页 |
| ·融合PCR反应 | 第29-31页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第31-32页 |
| ·PCR产物的回收与纯化 | 第32页 |
| ·限制性内切酶酶切 | 第32页 |
| ·DNA连接 | 第32-33页 |
| ·电脉冲感受态细胞的制备 | 第33页 |
| ·转化 | 第33页 |
| ·三亲本接合 | 第33-34页 |
| ·总DNA的提取 | 第34页 |
| ·质粒的提取 | 第34页 |
| ·胞外多糖的检测 | 第34-35页 |
| ·植株的致病性实验 | 第35页 |
| ·锌敏感性实验 | 第35页 |
| ·GUS(β-葡糖苷酸酶)活性检测 | 第35-36页 |
| ·总蛋白的提取 | 第36-37页 |
| ·Western blotting | 第37-39页 |
| ·Xcc总RNA的提取及去除DNA污染 | 第39-42页 |
| ·5′—RACE | 第42-46页 |
| ·zur缺失突变体的构建 | 第46页 |
| ·缺失突变体的互补 | 第46-47页 |
| 第三章 结果与分析 | 第47-72页 |
| ·P1和P2均有启动子活性 | 第47-52页 |
| ·启动子与gusA基因转录融合报告质粒的构建 | 第48-52页 |
| ·报告质粒的GUS活性 | 第52页 |
| ·启动子P1和P2的表达不受锌离子的影响 | 第52-53页 |
| ·zur转录起始位点的确定 | 第53-57页 |
| ·zur可能编码两个功能不同的蛋白 | 第57-72页 |
| ·缺失突变体的构建 | 第58-61页 |
| ·缺失突变体互补菌株的构建 | 第61页 |
| ·起始密码子点突变互补菌株的构建 | 第61-65页 |
| ·点突变互补菌株的锌敏感检测 | 第65-67页 |
| ·点突变互补菌株的致病性检测 | 第67-69页 |
| ·点突变互补菌株的EPS产量检测 | 第69-70页 |
| ·zur是否编码两个蛋白的Western blotting验证 | 第70-72页 |
| 第四章 结论与讨论 | 第72-77页 |
| ·结论 | 第72-73页 |
| ·讨论 | 第73-77页 |
| ·关于zur缺失突变体的构建 | 第73页 |
| ·关于两个起始密码子突变所用的点突变方法 | 第73-74页 |
| ·关于Xcc 8004中zur的启动子 | 第74页 |
| ·关于Xcc 8004中锌离子对zur表达的影响 | 第74-75页 |
| ·关于细菌中一个基因编码多个蛋白的现象 | 第75页 |
| ·关于ZurL和ZurS | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-85页 |
| 致谢 | 第85页 |