| 目录 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-22页 |
| 1.基因工程制药的研究进展 | 第12-13页 |
| 2.重组蛋白药物 | 第13-20页 |
| ·重组蛋白药物的生产原理 | 第13页 |
| ·重组蛋白药物的市场 | 第13-14页 |
| ·重组蛋白药物的表达系统 | 第14-17页 |
| ·真核生物表达系统 | 第14-16页 |
| ·原核生物表达系统 | 第16-17页 |
| ·几种重组蛋白药物 | 第17-20页 |
| ·促红细胞生成素(Erythropoietin,EPO) | 第17-18页 |
| ·干扰素-β(Interferon-β,IFN-β) | 第18-20页 |
| 3.蛋白质修饰的研究 | 第20页 |
| 4.本论文的研究目的和意义 | 第20-22页 |
| 实验部分 | 第22-51页 |
| 1.实验材料 | 第22-27页 |
| ·菌株和质粒 | 第22页 |
| ·分子克隆用酶和试剂 | 第22页 |
| ·培养基与溶液 | 第22-25页 |
| ·引物 | 第25页 |
| ·基因合成 | 第25-27页 |
| 2.实验方法 | 第27-34页 |
| ·促红细胞生成素(EPO)在大肠杆菌(Escherichia coli)中的表达纯化 | 第27-32页 |
| ·EPO全基因合成 | 第27页 |
| ·pET22b/EPO表达载体的构建 | 第27-29页 |
| ·pET15b/EPO表达载体的构建 | 第29页 |
| ·pT7-7/EPO表达载体的构建 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第30页 |
| ·连接产物的大肠杆菌转化 | 第30页 |
| ·重组质粒的制备 | 第30-31页 |
| ·重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3) | 第31页 |
| ·促红细胞生成素(EPO)在大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达 | 第31页 |
| ·目的蛋白的大量制备 | 第31-32页 |
| ·包涵体的处理 | 第32页 |
| ·干扰素-β(IFN-β)在大肠杆菌(Escherichia coli)中表达 | 第32-34页 |
| ·IFN-β全基因合成 | 第32页 |
| ·pET15b/IFN-β表达载体的构建 | 第32页 |
| ·重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3) | 第32-33页 |
| ·IFN-β在大肠杆菌BL21(DE3)诱导表达 | 第33-34页 |
| 3.实验结果 | 第34-49页 |
| ·促红细胞生成素(EPO)在大肠杆菌(Escherichia coli)中的表达 | 第34-47页 |
| ·EPO全基因合成 | 第34页 |
| ·表达载体pET22b/EPO的构建 | 第34-36页 |
| ·表达载体pET15b/EPO的构建 | 第36-37页 |
| ·表达载体pT7-7/EPO的构建 | 第37-39页 |
| ·促红细胞生成素的诱导表达 | 第39-42页 |
| ·表达条件的优化 | 第42-43页 |
| ·包涵体的复性和纯化 | 第43-44页 |
| ·复性EPO蛋白的纯化和分析 | 第44-47页 |
| ·干扰素-β(IFN-β)在大肠杆菌(Escherichia coli)中表达 | 第47-49页 |
| ·干扰素-β(IFN-β)基因的合成 | 第47页 |
| ·表达载体pET15b/IFN-β的构建 | 第47-48页 |
| ·干扰素-β(IFN-β)的诱导表达 | 第48-49页 |
| 讨论 | 第49-51页 |
| 1.基因的合成 | 第49页 |
| 2.表达载体及宿主的选择 | 第49-50页 |
| 3.表达条件的优化 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第59页 |
