| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 目录 | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-29页 |
| 1 表观遗传与DNA甲基化概述 | 第10-12页 |
| ·表观遗传学概述 | 第10-11页 |
| ·DNA甲基化概述 | 第11-12页 |
| 2 植物甲基化现象的发生、维系与消除 | 第12-13页 |
| ·植物甲基化现象的发生 | 第12页 |
| ·植物甲基化现象的维持 | 第12页 |
| ·植物甲基化现象的消除(去甲基化) | 第12-13页 |
| 3 DNA甲基化的功能 | 第13页 |
| 4 甲基化现象与环境因子决定概述 | 第13-17页 |
| ·环境因子通过甲基化作用实现表型遗传 | 第13-15页 |
| ·环境因子与甲基化现象相关研究成果 | 第15-17页 |
| 5 DNA甲基化研究方法概述 | 第17页 |
| 6 MSAP技术概述及原理 | 第17-20页 |
| ·MSAP技术概述 | 第17-18页 |
| ·MSAP技术原理 | 第18-20页 |
| 7 烤烟红花大金元品种概述 | 第20-21页 |
| 8 烤烟不同发育阶段特征概述 | 第21-22页 |
| 9 大理不同地域环境概况 | 第22页 |
| 10 近年烟草甲基化相关研究回顾 | 第22-25页 |
| 11 本项研究的目的及意义 | 第25-28页 |
| 12 试验流程图 | 第28-29页 |
| 第二章 材料与方法 | 第29-46页 |
| 1 材料的采集 | 第29-31页 |
| ·材料采集方法 | 第29-30页 |
| ·材料采集情况 | 第30-31页 |
| 2 主要试剂与引物 | 第31-34页 |
| ·主要试剂 | 第31-33页 |
| ·主要引物 | 第33-34页 |
| 3 主要仪器设备 | 第34-35页 |
| 4 实验方法 | 第35-46页 |
| ·DNA提取方法 | 第35-36页 |
| ·DNA纯度及浓度检测方法 | 第36页 |
| ·DNA的纯化方法 | 第36-37页 |
| ·接头和引物的配置 | 第37页 |
| ·酶切反应步骤及方法 | 第37-39页 |
| ·连接反应步骤及方法：(20μL体系) | 第39页 |
| ·预扩增体系及程序：(20μL体系) | 第39-40页 |
| ·选择性扩增体系及程序：(20μL体系) | 第40-41页 |
| ·Long-range Gel的使用方法及步骤 | 第41-42页 |
| ·银染方法及其步骤 | 第42页 |
| ·多态性条带的回收方法及步骤 | 第42页 |
| ·数据统计方法 | 第42-43页 |
| ·数据分析方法 | 第43-44页 |
| ·DH5α感受态细胞的制备 | 第44页 |
| ·回收的多态性片段与pMD-19T simple vector的连接方法 | 第44-45页 |
| ·感受态细胞的转化 | 第45页 |
| ·转化菌的筛选与鉴定 | 第45页 |
| ·测序结果分析 | 第45页 |
| ·菌株保储 | 第45-46页 |
| 第三章 实验结果 | 第46-78页 |
| 1 红花大金元烟草DNA提取结果 | 第46-48页 |
| 2 MSAP预扩增结果 | 第48-49页 |
| 3 MSAP选择性扩增结果 | 第49-51页 |
| 4 数据统计结果 | 第51-67页 |
| ·各地域环境下甲基化水平的初步分析 | 第51-57页 |
| ·营养生长阶段不同地域环境下甲基化模式的PCA及UPGMA初步分析结果 | 第57-63页 |
| ·生殖生长阶段不同地域环境下甲基化模式的PCA及UPGMA初步分析结果 | 第63-67页 |
| 5 不同发育阶段、不同地理环境下红花大金元样品甲基化模式的综合分析 | 第67-71页 |
| ·营养生长与生殖生长阶段各地样品甲基化总趋势的PCA分析 | 第68页 |
| ·营养生长与生殖生长阶段各地样品甲基化总趋势的UPGMA分析 | 第68-70页 |
| ·营养生长与生殖生长阶段各地样品的甲基化总趋势的初步分析 | 第70-71页 |
| 6 甲基化差异条带的回收、克隆及测序结果 | 第71-78页 |
| ·甲基化差异条带的回收结果 | 第71页 |
| ·差异片段的克隆及测序 | 第71-78页 |
| 第四章 讨论 | 第78-86页 |
| 1 表观遗传学方法的引入带来全新的研究角度 | 第78页 |
| 2 MSAP技术的运用及实验方法的改良 | 第78-80页 |
| 3 植物甲基化类型分布的同一性与差异性 | 第80页 |
| 4 不同地域环境下红花大金元甲基化类型的同一性与差异性 | 第80-81页 |
| 5 相同发育阶段,不同地域环境下甲基化差异分布规律 | 第81-82页 |
| 6 不同发育阶段导致完全不同的甲基化差异模式 | 第82-83页 |
| 7 多种影响甲基化状态的因素在克隆测序结果中得到体现 | 第83-86页 |
| 第五章 总结与展望 | 第86-89页 |
| 1 试验结果总结 | 第86-87页 |
| 2 不足与改进 | 第87页 |
| 3 回顾与展望 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-93页 |
| 附录 | 第93-98页 |
| 致谢 | 第98-100页 |
