| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 缩略词 | 第9-14页 |
| 1 绪论 | 第14-32页 |
| ·研究背景与意义 | 第14-15页 |
| ·乙酰胆碱酯酶基因研究进展 | 第15-20页 |
| ·乙酰胆碱酯酶基因的克隆 | 第15-19页 |
| ·乙酰胆碱酯酶基因的表达 | 第19-20页 |
| ·乙酰胆碱酯酶的结构 | 第20-23页 |
| ·乙酰胆碱酯酶的功能 | 第23-24页 |
| ·昆虫ACE 的分子进化 | 第24-25页 |
| ·昆虫乙酰胆碱酯酶与有机磷杀虫剂抗性 | 第25-27页 |
| ·代谢抗性 | 第25-26页 |
| ·靶标抗性 | 第26-27页 |
| ·研究目标和整体思路 | 第27-28页 |
| ·研究目标 | 第27-28页 |
| ·整体思路 | 第28页 |
| ·研究内容和技术路线 | 第28-31页 |
| ·东亚飞蝗乙酰胆碱酯酶基因的克隆及序列分析 | 第28-30页 |
| ·东亚飞蝗乙酰胆碱酯酶基因的原核表达与抗体制备 | 第30页 |
| ·东亚飞蝗乙酰胆碱酯酶真核表达载体的构建与表达 | 第30-31页 |
| ·东亚飞蝗乙酰胆碱酯酶RNA 干扰 | 第31页 |
| ·本研究的创新性 | 第31-32页 |
| 2 材料和方法 | 第32-65页 |
| ·材料 | 第32-34页 |
| ·供试昆虫 | 第32页 |
| ·菌株 | 第32页 |
| ·主要仪器设备 | 第32-33页 |
| ·主要试剂 | 第33-34页 |
| ·溶液配制? | 第34-39页 |
| ·分子生物学实验溶液的配制 | 第34-36页 |
| ·培养基 | 第36-37页 |
| ·蛋白质SDS-PAGE 溶液配制 | 第37-38页 |
| ·包涵体洗涤、纯化溶液的配制 | 第38-39页 |
| ·乙酰胆碱酯酶活性测定底物-显色剂溶液 | 第39页 |
| ·Western blot 试剂 | 第39页 |
| ·东亚飞蝗ACE 基因克隆 | 第39-48页 |
| ·ace 保守序列的PCR 扩增、克隆及序列测定 | 第39-42页 |
| ·3'-RACE 和5'-RACE 克隆ace 3'-端和5'-端cDNA 序列 | 第42-45页 |
| ·Lm-AChE cDNA 全长序列的克隆 | 第45-46页 |
| ·AChE 基因的Southern 杂交分析 | 第46-48页 |
| ·东亚飞蝗RNAI | 第48-53页 |
| ·dsRNA 的合成 | 第48-49页 |
| ·dsRNA 的注射 | 第49-50页 |
| ·RNA 干扰效果检测 | 第50-53页 |
| ·抗LM-ACHE 血清的制备 | 第53-57页 |
| ·Lm-AChE 片断在大肠杆菌(BL21)中的融合表达 | 第53-55页 |
| ·包涵体制备与纯化 | 第55页 |
| ·蛋白染色方法 | 第55-56页 |
| ·鼠抗Lm-AChE 血清的制备 | 第56页 |
| ·鼠抗Lm-AChE 血清效价测定 | 第56-57页 |
| ·鼠抗Lm-AChE 血清Western-blotting 分析 | 第57页 |
| ·东亚飞蝗乙酰胆碱酯酶在毕赤酵母中的表达 | 第57-65页 |
| ·重组表达质粒AChE-pPIC9K 的构建 | 第57-59页 |
| ·电激法转化Pichia pastoris KM71 | 第59-61页 |
| ·重组AChE 高表达毕赤酵母菌株的筛选 | 第61-62页 |
| ·重组AChE 的纯化 | 第62页 |
| ·重组AChE 酶学特性分析 | 第62-65页 |
| 3 结果与分析 | 第65-86页 |
| ·东亚飞蝗ACE 基因克隆和分析 | 第65-73页 |
| ·东亚飞蝗ace 基因保守片段的克隆和分析 | 第65-67页 |
| ·5' RACE 和3' RACE 克隆ace 5'-端和3'-端序列 | 第67-68页 |
| ·东亚飞蝗ace 的分析 | 第68-73页 |
| ·东亚飞蝗 ACHE 系统进化 | 第73-75页 |
| ·东亚飞蝗若虫RNAI | 第75-78页 |
| ·DNA 模板 | 第75页 |
| ·dsRNA 的制备 | 第75页 |
| ·东亚飞蝗若虫RNAi | 第75-76页 |
| ·若虫RNAi 效果分析 | 第76-78页 |
| ·抗LM-ACHE 血清的制备 | 第78-81页 |
| ·东亚飞蝗重组乙酰胆碱酯酶的酶学特性 | 第81-86页 |
| ·乙酰胆碱酯酶高表达菌株的筛选 | 第81页 |
| ·乙酰胆碱酯酶在毕赤酵母中的表达 | 第81-82页 |
| ·重组乙酰胆碱酯酶的纯化 | 第82-83页 |
| ·重组乙酰胆碱酯酶活性与pH 的关系 | 第83页 |
| ·重组乙酰胆碱酯酶活性与温度的关系 | 第83-84页 |
| ·重组乙酰胆碱酯的动力学特性 | 第84页 |
| ·重组乙酰胆碱酯的抑制特性 | 第84-86页 |
| 4 讨论 | 第86-98页 |
| ·东亚飞蝗 ACHE 基因 | 第86-95页 |
| ·东亚飞蝗AChE 基因的克隆 | 第86-90页 |
| ·东亚飞蝗AChE 基因的特点 | 第90-92页 |
| ·东亚飞蝗AChE 基因的功能 | 第92-94页 |
| ·东亚飞蝗AChE 与抗药性 | 第94-95页 |
| ·BIOASSAY 在东亚飞蝗抗性研究中的应用 | 第95-96页 |
| ·RNAI 在东亚飞蝗研究中的应用 | 第96-98页 |
| 5 结论与展望 | 第98-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-114页 |
| 附录 | 第114页 |
| A 博士期间论文发表情况 | 第114页 |
| B 电鳐乙酰胆碱酯酶一级结构 | 第114页 |
