| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-7页 |
| 第一章 前言 | 第7-21页 |
| 1.蛋白激酶B(PKB/AKT) | 第8-14页 |
| ·PKB/AKT的结构 | 第9-10页 |
| ·PKB/AKT的功能 | 第10-12页 |
| ·PKB/AKT的激活 | 第12-13页 |
| ·PKB/AKT的抑制 | 第13-14页 |
| 2.蛋白质磷酸酶 | 第14-19页 |
| ·蛋白磷酸酶1(PP-1) | 第15-18页 |
| ·蛋白磷酸酶2A(PP2A) | 第18-19页 |
| 3.本课题的研究 | 第19-21页 |
| 第二章 实验部分之材料和方法 | 第21-45页 |
| 1.材料与试剂 | 第21-22页 |
| ·材料 | 第21页 |
| ·试剂 | 第21页 |
| ·仪器 | 第21-22页 |
| 2.实验方法 | 第22-45页 |
| ·含有Human AKT1 cDNA序列的质粒的提取 | 第22-25页 |
| ·野生型和定点突变型GST表达载体的构建 | 第25-30页 |
| ·野生型和定点突变型pCI-neo表达载体的构建 | 第30-31页 |
| ·GST融合蛋白的制备 | 第31-34页 |
| ·体外去磷酸化反应 | 第34-37页 |
| ·HLE和ARPE-19细胞的培养 | 第37页 |
| ·免疫沉降及Western blot分析 | 第37-39页 |
| ·免疫荧光分析 | 第39-40页 |
| ·Calyculin A处理细胞以及Western blot分析 | 第40-41页 |
| ·特异性siRNA对PP-1和PP-2A进行Knock-down | 第41页 |
| ·过表达PP-1和PP-2A及Western blot分析 | 第41-45页 |
| 第三章 实验结果和讨论 | 第45-63页 |
| 1.实验结果 | 第45-58页 |
| ·野生型和定点突变型GST表达载体的构建 | 第45-47页 |
| ·野生型和定点突变型pCI-neo表达载体的构建 | 第47-49页 |
| ·PP一1能在体外使AKTI的Thr45O位点去磷酸化 | 第49-53页 |
| ·PP-1的催化亚基能在体内与AKT1结合成复合体 | 第53-55页 |
| ·Calyculin A对PP-1和PP-2A的抑制作用能增强AKT1-Thr450的磷酸化 | 第55-56页 |
| ·特异性siRNA对PP-1进行Knock-down,能引起AKT1的Thr450位点高磷酸化 | 第56-57页 |
| ·过表达PP-1导致AKT1-Thr450的去磷酸化状态增强 | 第57-58页 |
| 2.讨论 | 第58-63页 |
| ·PP-1是使AKT1的Thr450位点去磷酸化的主要的蛋白磷酸酶 | 第58-59页 |
| ·PP-1使AKT1的Thr450位点去磷酸化从而调节AKT信号通路的功能 | 第59-61页 |
| ·蛋白质的去磷酸化调节是一个分子开关 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 致谢 | 第71-73页 |
