| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 1.文献综述 | 第11-28页 |
| ·大肠杆菌(Escherichia coli) | 第11-16页 |
| ·大肠杆菌的分类 | 第12页 |
| ·肠外致病性大肠杆菌的特性 | 第12-16页 |
| ·Toll样受体(Toll-like receptor,TLR) | 第16-22页 |
| ·TLR分子的结构特点 | 第16页 |
| ·TLR受体的配体 | 第16-17页 |
| ·TLR受体与细菌LPS信号转导 | 第17-20页 |
| ·MyD88与细菌LPS信号转导 | 第20-22页 |
| ·激活调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES,CCL5) | 第22-28页 |
| ·RANTES的结构 | 第22-23页 |
| ·RANTES的作用机制 | 第23-24页 |
| ·RANTES的生物学功能 | 第24-28页 |
| 2.研究目的和意义 | 第28-29页 |
| 3.材料与方法 | 第29-42页 |
| ·实验材料 | 第29-33页 |
| ·菌株、质粒和细胞系 | 第29页 |
| ·载体与质粒 | 第29-30页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第30-31页 |
| ·培养基与抗生素及其配制 | 第31页 |
| ·主要缓冲液与相关试剂及其配制 | 第31-33页 |
| ·试验方法 | 第33-42页 |
| ·细菌基因组DNA的提取 | 第33页 |
| ·PCR扩增 | 第33页 |
| ·限制性内切酶酶切反应 | 第33-34页 |
| ·PCR产物或酶切产物的电泳检测 | 第34页 |
| ·线性质粒DNA末端去磷酸化 | 第34页 |
| ·PCR产物或酶切产物回收与纯化 | 第34-35页 |
| ·外源DNA片段与质粒载体的连接反应 | 第35-36页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第36页 |
| ·连接产物的转化 | 第36页 |
| ·质粒的制备与鉴定 | 第36-39页 |
| ·质粒转染(脂质体介导转染法) | 第39页 |
| ·双荧光素酶的检测 | 第39-40页 |
| ·细菌的计数 | 第40页 |
| ·细菌对小鼠的急性毒性试验 | 第40页 |
| ·细菌的MIC试验 | 第40-41页 |
| ·细菌的单因子血清玻片凝集试验 | 第41-42页 |
| 4.结果与分析 | 第42-52页 |
| ·ExPEC E044株药敏试验 | 第42页 |
| ·ExPEC E044单因子血清玻片凝集试验 | 第42页 |
| ·ExPEC E044质粒对昆明小鼠毒力影响 | 第42-44页 |
| ·细菌对昆明小鼠毒性试验 | 第43-44页 |
| ·ExPEC E044质粒测序和分析 | 第44-45页 |
| ·RANTES(CCL5)启动子报告质粒及突变体构建 | 第45-48页 |
| ·原始菌株E044 P~+对RANTES(CCL5)的信号通路的影响 | 第48-52页 |
| 5.讨论与结论 | 第52-54页 |
| ·讨论 | 第52页 |
| ·结论 | 第52-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
