| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-13页 |
| 0 前言 | 第13-27页 |
| 第一部分 桔霉素三聚体TricitirnloB体外抗肿瘤作用研究 | 第27-51页 |
| ·材料与方法 | 第28-35页 |
| ·药品和试剂 | 第28页 |
| ·主要仪器 | 第28-29页 |
| ·细胞株以及细胞培养 | 第29-31页 |
| ·肿瘤细胞增殖抑制试验 | 第31-32页 |
| ·DNA Laddre分析 | 第32-33页 |
| ·Anneixn-V/PI双染检测细胞凋亡 | 第33页 |
| ·线粒体膜电位检测 | 第33页 |
| ·Western Blot检测 | 第33-35页 |
| ·结果 | 第35-49页 |
| ·桔霉素衍生物的肿瘤细胞增殖抑制活性初步评价 | 第35-36页 |
| ·Tricitrinol B对肿瘤细胞的体外生长抑制作用 | 第36-38页 |
| ·Tricitrinol B诱导HL-60细胞凋亡 | 第38-49页 |
| ·Tricitrinol B诱导HL-60细胞DNA Ladder形成 | 第38-39页 |
| ·Tricitrinol B引起HL-60细胞Annexin V/PI染色阳性细胞增加 | 第39-42页 |
| ·Tricitrinol B破坏线粒体膜电位 | 第42-45页 |
| ·Tricitrinol B引起细胞凋亡相关蛋白的改变 | 第45-47页 |
| ·Caspase抑制剂可逆转Tricitrinol B诱导的细胞凋亡 | 第47-49页 |
| ·讨论 | 第49-51页 |
| 第二部分 桔霉素三聚体Tricitrinol B的抗肿瘤机制研究 | 第51-82页 |
| 第一节 Tricitrinol B对DNA拓扑异构酶的影响 | 第51-69页 |
| ·材料与方法 | 第53-58页 |
| ·药品和试剂 | 第53页 |
| ·主要仪器 | 第53-54页 |
| ·细胞培养 | 第54页 |
| ·TopoⅠ介导的负超螺旋pBR322解旋反应 | 第54页 |
| ·TopoⅠ介导的负超螺旋pBR322切割实验 | 第54页 |
| ·TopoⅡ介导的负超螺旋pBR322解旋反应 | 第54-55页 |
| ·TopoⅡ介导的kDNA去连环反应 | 第55页 |
| ·ICE(in vivo complex of enzyme)实验 | 第55-56页 |
| ·中性单细胞凝胶电泳(neurtalsinglecellgelelectr0phoersis,NSCGE) | 第56页 |
| ·瞬时转染化学合成siRNA | 第56-57页 |
| ·Western Blot法 | 第57-58页 |
| ·结果 | 第58-67页 |
| ·Tricitrinol B抑制TopoⅠ介导的负超螺旋pBR322解旋作用 | 第58页 |
| ·Tricitrinol B不能稳定TopoⅠ和DNA形成的可切割复合物 | 第58-60页 |
| ·Tricitrinol B抑制TopoⅡ介导的负超螺旋pBR322解旋作用 | 第60-61页 |
| ·Tricitrinol B抑制TopoⅡ介导的kDNA去连环作用 | 第61-62页 |
| ·Tricitrinol B能够稳定TopoⅡ和DNA形成的可切割复合物 | 第62-63页 |
| ·Tricitrinol B诱导DNA双链断裂 | 第63-65页 |
| ·彗星实验检测Tricitrinol B诱导细胞DNA双链断裂损伤 | 第63-64页 |
| ·Tricitrinol B诱导HL-60细胞γ-H2AX水平的表达升高 | 第64-65页 |
| ·RNAi干扰TopoⅡα后Tricitrinol B的凋亡诱导作用减弱 | 第65-67页 |
| ·讨论 | 第67-69页 |
| 第二节 Tricitrinol B对DNA拓扑异构酶11催化循环的影响 | 第69-82页 |
| ·材料与方法 | 第71-74页 |
| ·药品和试剂 | 第71页 |
| ·主要仪器 | 第71页 |
| ·DNA伸展实验 | 第71-72页 |
| ·EB替代分析 | 第72页 |
| ·DNA迁移检测Topo和DNA的结合 | 第72页 |
| ·链转移前和链转移后TopoⅡ介导的DNA断裂 | 第72页 |
| ·链转移前和链转移后TopoⅡ介导的DNA再连接 | 第72-74页 |
| ·结果 | 第74-79页 |
| ·Tricitrinol B是一个DNA嵌入剂 | 第74-75页 |
| ·Tricitrinol B能抑制TopoⅡ和DNA的结合 | 第75-76页 |
| ·Tricitrinol B对链转移前和链转移后TopoⅡ介导的DNA切割的影响 | 第76-77页 |
| ·Tricitrinol B对链转移前和链转移后TopoⅡ介导的DNA再连接的影响 | 第77-79页 |
| ·讨论 | 第79-82页 |
| 结论 | 第82-83页 |
| 创新 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-93页 |
| 缩略词表 | 第93-95页 |
| 综述 | 第95-103页 |
| 参考文献 | 第100-103页 |
| 致谢 | 第103页 |
