| 中文摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 目录 | 第5-8页 |
| 1 前言 | 第8-20页 |
| ·抗坏血酸过氧化物酶简介 | 第8-11页 |
| ·抗坏血酸过氧化物酶的发现 | 第8页 |
| ·APX的反应机制 | 第8-10页 |
| ·APX基因家族概述 | 第10-11页 |
| ·APX基因分子生物学和酶学特征及研究现状 | 第11-16页 |
| ·分子生物学和酶学特征 | 第11-12页 |
| ·APX分子生物学研究 | 第12-14页 |
| ·酶活性的研究 | 第14-15页 |
| ·APX酶在细胞中的定位 | 第15-16页 |
| ·APX基因的表达分析 | 第16-17页 |
| ·基因的表达 | 第16-17页 |
| ·APX转基因的正义表达和反义表达 | 第17页 |
| ·启动子简单介绍 | 第17-18页 |
| ·真核生物基因启动子简介 | 第17页 |
| ·不同类型启动子概述 | 第17-18页 |
| ·类型Ⅱ启动子 | 第18页 |
| ·类型Ⅰ启动子 | 第18页 |
| ·类型Ⅲ启动子 | 第18页 |
| ·研究目的 | 第18-20页 |
| 2 毛白杨APX基因启动子的克隆 | 第20-40页 |
| ·毛果杨APX基因启动子的电子克隆 | 第20-21页 |
| ·实验材料 | 第20页 |
| ·实验方法 | 第20页 |
| ·结果与分析 | 第20-21页 |
| ·水稻OSAPX2(AB053297.1)序列 | 第20页 |
| ·毛果杨APX基因启动子序列的获得 | 第20-21页 |
| ·毛白杨APX基因启动子的克隆 | 第21-27页 |
| ·实验准备 | 第21页 |
| ·实验方法 | 第21-25页 |
| ·毛白杨组培苗DNA的提取 | 第21-22页 |
| ·引物设计 | 第22页 |
| ·聚合酶链式反应 | 第22-23页 |
| ·PCR反应扩增产物的回收 | 第23页 |
| ·PCR产物与pMD18-T载体连接 | 第23页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌JM109 | 第23-24页 |
| ·质粒的提取和菌液测序 | 第24-25页 |
| ·结果与分析 | 第25-27页 |
| ·PCR克隆结果 | 第25页 |
| ·PCR产物测序结果 | 第25-27页 |
| ·序列分析 | 第27-40页 |
| ·序列同源性比较 | 第27-34页 |
| ·启动子序列生物信息分析 | 第34-40页 |
| 3 四个毛白杨APX基因的原核表达和两个基因的酶学特性分析 | 第40-50页 |
| ·毛白杨APX原核表达载体的构建 | 第40页 |
| ·APX基因的原核表达和目的蛋白的纯化 | 第40-45页 |
| ·实验材料及试剂准备 | 第40-41页 |
| ·实验步骤 | 第41-44页 |
| ·APX1在BL21中的诱导表达以及纯化 | 第41-42页 |
| ·APX1的诱导表达 | 第41页 |
| ·APX1的纯化 | 第41-42页 |
| ·APX2在BL21中的诱导表达以及纯化 | 第42-43页 |
| ·APX2的诱导表达 | 第42页 |
| ·APX2基因的纯化 | 第42-43页 |
| ·APX3在BL21中的诱导表达以及纯化 | 第43-44页 |
| ·APX3的诱导表达 | 第43页 |
| ·APX3基因的纯化 | 第43-44页 |
| ·APX4在BL21中的诱导表达以及纯化 | 第44页 |
| ·结果与分析 | 第44-45页 |
| APX基因的诱导表达及纯化结果 | 第44-45页 |
| ·APX1、APX2蛋白的酶学特性分析 | 第45-49页 |
| ·实验材料 | 第45-46页 |
| ·实验过程 | 第46-47页 |
| ·结果与分析 | 第47-49页 |
| ·双倒数法求APX基因(APX1、APX2)重组蛋白的Km和Vm值 | 第47-48页 |
| ·PH值变化对重组蛋白活性的影响 | 第48-49页 |
| ·小结 | 第49-50页 |
| 4 APX基因(APX2)在毛白杨中的表达定量分析 | 第50-55页 |
| ·实验材料 | 第50页 |
| ·植物材料 | 第50页 |
| ·试剂 | 第50页 |
| ·仪器 | 第50页 |
| ·PCR引物 | 第50页 |
| ·实验步骤 | 第50-52页 |
| ·仪器预处理 | 第50页 |
| ·试剂准备 | 第50-51页 |
| ·RNA提取 | 第51页 |
| ·逆转录 | 第51-52页 |
| ·标准曲线的制作 | 第52页 |
| ·荧光定量PCR反应 | 第52页 |
| ·结果与分析 | 第52-54页 |
| ·实时定量PCR条件的优化 | 第52-53页 |
| ·内参基因标准曲线 | 第53页 |
| ·目标基因产物的温度溶解曲线 | 第53-54页 |
| ·目标基因的相对定量结果 | 第54页 |
| ·小结 | 第54-55页 |
| 5 结论及讨论 | 第55-58页 |
| ·结论 | 第55-56页 |
| ·讨论与展望 | 第56-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 附录 | 第62-63页 |
| 附录A:缓冲液的配制 | 第62页 |
| 附录B:LB培养基 | 第62页 |
| 附录C:Brabford法测蛋白含量所需试剂 | 第62-63页 |
| 缩略词 | 第63-64页 |
| 个人简介 | 第64-65页 |
| 导师简介 | 第65-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
