| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-38页 |
| 前言 | 第14页 |
| 1 生物的Al毒和耐Al机制研究进展 | 第14-25页 |
| ·植物的Al毒和耐Al机制 | 第15-21页 |
| ·植物的Al毒机理 | 第15-16页 |
| ·植物耐Al机制 | 第16-21页 |
| ·酵母的Al毒和耐Al机制 | 第21-24页 |
| ·酵母的Al毒研究 | 第21-23页 |
| ·应用酵母研究植物耐Al的机理 | 第23-24页 |
| ·哺乳动物的Al毒研究 | 第24-25页 |
| 2 细胞Ca信号研究进展 | 第25-32页 |
| ·细胞Ca信号 | 第25-26页 |
| ·酵母作为研究Ca~(2+)动态平衡的模型 | 第26-31页 |
| ·Ca~(2+)在酵母中的运输 | 第26-30页 |
| ·Ca信号途径 | 第30-31页 |
| ·Ca~(2+)和细胞死亡 | 第31页 |
| ·Al毒与Ca信号 | 第31-32页 |
| 3 细胞凋亡 | 第32-36页 |
| ·细胞凋亡概述 | 第32页 |
| ·酵母细胞凋亡 | 第32-33页 |
| ·凋亡抑制基因 | 第33-35页 |
| ·Bcl-2 | 第34页 |
| ·Ced-9 | 第34-35页 |
| ·BI-1 | 第35页 |
| ·凋亡抑制基因在调控Ca信号过程中的作用 | 第35-36页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第36-38页 |
| 第二章 酵母pmc1突变体对Al毒敏感 | 第38-52页 |
| 1 实验材料 | 第38-39页 |
| ·酵母菌株 | 第38页 |
| ·质粒 | 第38-39页 |
| 2 实验方法 | 第39-43页 |
| ·培养基配置 | 第39页 |
| ·试剂和主要仪器 | 第39-40页 |
| ·金属离子母液 | 第39页 |
| ·缓冲液 | 第39-40页 |
| ·主要仪器 | 第40页 |
| ·酵母细胞质粒转化 | 第40-41页 |
| ·酵母平板点样 | 第41页 |
| ·生长曲线 | 第41页 |
| ·凋亡检测 | 第41-43页 |
| ·DAPI染色 | 第41-42页 |
| ·Annexin V/PI染色 | 第42-43页 |
| ·TUNEL染色 | 第43页 |
| 3 实验结果 | 第43-50页 |
| ·酵母pmc1突变体对Al毒敏感 | 第43-45页 |
| ·Ca信号是Al~(3+)诱导酵母发生PCD的早期事件 | 第45-47页 |
| ·酵母pmc1突变体对Al毒敏感的特异性 | 第47-48页 |
| ·酵母pmc1突变体对Al~(3+)敏感与pH变化无关 | 第48-50页 |
| 4 讨论 | 第50-52页 |
| ·胞质Ca信号可能对调节酵母细胞的Al耐受性起重要作用 | 第50页 |
| ·酵母pmc1突变体对Al胁迫敏感的特异性 | 第50-51页 |
| ·酵母pmc1突变体对Al~(3+)敏感与pH的变化无关 | 第51-52页 |
| 第三章 过表达PMC1能够降低酵母对Al~(3+)的敏感性 | 第52-68页 |
| 1 实验材料 | 第52-53页 |
| ·菌株 | 第52-53页 |
| ·质粒 | 第53页 |
| 2 实验方法 | 第53-60页 |
| ·培养基配置 | 第53页 |
| ·试剂和主要仪器 | 第53-54页 |
| ·试剂 | 第53页 |
| ·主要仪器 | 第53-54页 |
| ·酵母细胞基因组DNA提取 | 第54页 |
| ·酵母表达载体构建 | 第54-55页 |
| ·克隆引物设计 | 第54-55页 |
| ·载体构建流程 | 第55页 |
| ·酵母细胞质粒转化 | 第55-56页 |
| ·酵母细胞总RNA提取(Trizol法) | 第56-57页 |
| ·半定量RT-PCR | 第57-58页 |
| ·逆转录RT | 第57页 |
| ·半定量PCR引物 | 第57-58页 |
| ·半定量PCR程序 | 第58页 |
| ·实时定量RT-PCR | 第58-59页 |
| ·逆转录RT | 第58页 |
| ·引物合成及验证 | 第58页 |
| ·定量方法 | 第58-59页 |
| ·PCR程序及分析溶解曲线 | 第59页 |
| ·酵母平板点样 | 第59-60页 |
| ·流式细胞仪检测酵母细胞内Ca~(2+)水平 | 第60页 |
| ·流式细胞仪原理 | 第60页 |
| ·酵母胞内Ca~(2+)水平的检测 | 第60页 |
| 3 实验结果 | 第60-65页 |
| ·Ca~(2+)通道基因表达载体的构建 | 第60-61页 |
| ·Ca~(2+)通道基因在酵母中过量表达 | 第61-62页 |
| ·过表达PMC1能够增强酵母对Al的耐受性 | 第62-64页 |
| ·PMC1基因影响酵母胞内Ca信号水平 | 第64-65页 |
| 4 讨论 | 第65-68页 |
| ·Ca~(2+)通道调控胞质Ca~(2+)水平 | 第65-66页 |
| ·过表达PMC1能够降低酵母对Al毒的的敏感性 | 第66-68页 |
| 第四章 酵母胞质Ca~(2+)水平的调节可以增强细胞对Al耐受性 | 第68-82页 |
| 1 实验材料 | 第68页 |
| ·菌株 | 第68页 |
| ·质粒 | 第68页 |
| 2 实验方法 | 第68-71页 |
| ·培养基的配置 | 第68-69页 |
| ·试剂和主要仪器 | 第69页 |
| ·BAPTA-AM预处理 | 第69页 |
| ·酵母细胞存活率测定 | 第69页 |
| ·酵母细胞质粒转化 | 第69页 |
| ·酵母细胞总RNA提取(Trizol法) | 第69页 |
| ·半定量RT-PCR | 第69-70页 |
| ·逆转录RT | 第69-70页 |
| ·半定量PCR引物 | 第70页 |
| ·半定量PCR程序 | 第70页 |
| ·定量RT-PCR | 第70-71页 |
| ·酵母平板点样 | 第71页 |
| ·流式细胞仪检测酵母胞内Ca~(2+)水平 | 第71页 |
| 3 结果与分析 | 第71-79页 |
| ·Ca~(2+)螯合剂可以增强酵母对Al的耐受性 | 第71-75页 |
| ·BAPTA-AM能够抑制Al~(3+)引起的细胞死亡 | 第71-73页 |
| ·BAPTA-AM能够降低Al~(3+)引起的胞质Ca~(2+)的上升幅度 | 第73-75页 |
| ·异源凋亡抑制基因表达可以增强酵母对Al的耐受性 | 第75-77页 |
| ·凋亡抑制基因在酵母中表达的鉴定 | 第75页 |
| ·凋亡抑制基因表达可以增强酵母对Al的耐受性 | 第75-76页 |
| ·凋亡抑制因子能够降低Al~(3+)引起的胞质Ca~(2+)的上升幅度 | 第76-77页 |
| ·酵母Ca信号途径中的成员参与了酵母应答Al胁迫的过程 | 第77-79页 |
| 4 讨论 | 第79-82页 |
| ·胞质Ca~(2+)水平的下调可能是细胞增强Al耐受性的一种方法 | 第79页 |
| ·凋亡抑制基因增强酵母对Al的耐受性 | 第79-82页 |
| 第五章 总结和展望 | 第82-86页 |
| 1 论文主要结果 | 第83页 |
| 2 论文的创新点 | 第83-84页 |
| 3 展望 | 第84-86页 |
| 参考文献 | 第86-104页 |
| 缩略词-中英文对照 | 第104-106页 |
| 作者简介 | 第106-108页 |
| 致谢 | 第108页 |
