| 中文摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-15页 |
| 1 引言 | 第15-30页 |
| ·牛传染性鼻气管炎的介绍 | 第15-18页 |
| ·牛传染性鼻气管炎病毒的介绍 | 第18-22页 |
| ·BHV-1作为活载体的研究 | 第22-24页 |
| ·口蹄疫的概述 | 第24-25页 |
| ·口蹄疫病毒的概述 | 第25-26页 |
| ·口蹄疫病毒VP1基因的研究 | 第26-28页 |
| ·研究目的与意义 | 第28-30页 |
| 2 材料与方法 | 第30-43页 |
| ·试验材料 | 第30-31页 |
| ·细胞与病毒 | 第30页 |
| ·菌种、质粒及血清 | 第30页 |
| ·主要试剂 | 第30-31页 |
| ·主要的仪器设备 | 第31页 |
| ·实验动物 | 第31页 |
| ·试验方法 | 第31-43页 |
| ·FMDV Asial VP1基因的原核表达 | 第31-34页 |
| ·VP1基因的扩增与回收 | 第31-32页 |
| ·VP1基因的克隆与鉴定 | 第32页 |
| ·VP1蛋白的表达 | 第32页 |
| ·表达产物的纯化 | 第32-34页 |
| ·表达产物的Western blotting分析 | 第34页 |
| ·表达产物间接酶联免疫吸附试验检测 | 第34页 |
| ·兔抗重组VP1蛋白(rVP1)多克隆抗体的制备 | 第34-35页 |
| ·rVP1的兔体免疫 | 第34页 |
| ·兔抗rVP1间接酶联免疫吸附试验效价测定 | 第34页 |
| ·兔抗rVP1琼脂免疫扩散试验效价测定 | 第34页 |
| ·兔抗rVP1中和抗体效价测定 | 第34-35页 |
| ·表达FMDV Asial VP1基因重组BHV-1的构建 | 第35-38页 |
| ·转移载体的构建与鉴定 | 第35页 |
| ·转移载体的大量制备 | 第35-36页 |
| ·rBHV-1/gE~-/LacZ~+基因组DNA的制备 | 第36-37页 |
| ·转移载体与亲本病毒rBHV-1/gE~-/LacZ~+基因组DNA的共转染 | 第37页 |
| ·重组病毒(rBHV-1/gE~-/AsiaVP1)的筛选 | 第37页 |
| ·rBHV-1/gE~-/AsiaVP1的PCR鉴定 | 第37-38页 |
| ·rBHV-1/gE~-/AsiaVP1生物学特性的研究 | 第38-39页 |
| ·rBHV-1/gE~-/AsiaVP1与rBHV-1/gE~-/LacZ~+的TCID_(50)的比较 | 第38-39页 |
| ·rBHV-1/gE~-/AsiaVP1中VP1基因表达的Western blotting检测 | 第39页 |
| ·rBHV-1/gE~-/AsiaVP1中VP1基因表达的IFA检测 | 第39页 |
| ·VP1基因在rBHV-1/gE~-/AsiaVP1中的遗传稳定性鉴定 | 第39页 |
| ·rBHV-1/gE~-/AsiaVP1的动物试验 | 第39-43页 |
| ·rBHV-1/gE~-/AsiaVP1与rBHV-1/gE~-/LacZ~+的动物免疫攻毒程序 | 第39-40页 |
| ·免疫动物血清IBRV中和抗体的检测 | 第40页 |
| ·免疫动物血清FMDV Asial VP1 ELISA抗体的检测 | 第40页 |
| ·免疫动物攻毒后采集的鼻拭子TCID_(50)测定 | 第40页 |
| ·免疫动物攻毒后组织学检测 | 第40-41页 |
| ·免疫动物攻毒后组织病毒分离 | 第41-43页 |
| 3 实验结果 | 第43-64页 |
| ·FMDV Asial VP1基因的原核表达 | 第43-46页 |
| ·VP1基因的PCR扩增结果 | 第43页 |
| ·VP1基因表达质粒的构建与鉴定 | 第43-44页 |
| ·VP1基因的表达与纯化 | 第44页 |
| ·表达产物的Western blotting分析 | 第44-46页 |
| ·rVP1的间接ELISA检测 | 第46页 |
| ·兔抗VP1蛋白多克隆抗体的检测 | 第46-48页 |
| ·兔抗VP1蛋白多克隆抗体中和效价与琼扩效价测定 | 第46-47页 |
| ·兔抗VP1蛋白多克隆抗体ELISA效价测定 | 第47-48页 |
| ·表达FMDV Asial VP1基因重组BHV-1的构建 | 第48-50页 |
| ·转移载体的酶切鉴定 | 第48-49页 |
| ·转移载体的测序鉴定 | 第49-50页 |
| ·重组病毒的筛选 | 第50页 |
| ·重组病毒的鉴定 | 第50-52页 |
| ·重组病毒VP1基因的PCR鉴定 | 第50-51页 |
| ·重组病毒LacZ基因的PCR鉴定 | 第51页 |
| ·重组病毒VP1基因插入部位的PCR鉴定 | 第51-52页 |
| ·重组病毒生物学特性的研究 | 第52-56页 |
| ·rBHV-1/gE~-/AsiaVP1与rBHV-1/gE~-/LacZ~+的TCID_(50)比较 | 第52-53页 |
| ·rBHV-1/gE~-/AsiaVP1中VP1基因表达的Western blotting检测 | 第53-54页 |
| ·rBHV-1/gE~-/AsiaVP1中VP1基因表达的IFA检测 | 第54-55页 |
| ·VP1基因在rBHV-1/gE~-/AsiaVP1中的遗传稳定性鉴定 | 第55-56页 |
| ·rBHV-1/gE~-/AsiaVP1的兔体免疫研究 | 第56-64页 |
| ·免疫兔血清IBRV中和抗体检测结果 | 第56页 |
| ·免疫兔血清抗FMDV Asial VP1抗体检测结果 | 第56-58页 |
| ·实验动物攻毒后采集的鼻拭子TCID_(50)测定 | 第58页 |
| ·实验动物攻毒后的体温变化情况 | 第58页 |
| ·实验动物攻毒后的临床表现 | 第58-59页 |
| ·免疫动物攻毒后组织学检测 | 第59-63页 |
| ·免疫动物攻毒后组织的病毒分离 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-73页 |
| ·目的基因的确定 | 第64-66页 |
| ·VP1基因在原核系统中的表达 | 第66页 |
| ·表达口蹄疫基因重组BHV-1的构建 | 第66-69页 |
| ·VP1基因插入部位的权衡 | 第69-73页 |
| 5 结论 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-87页 |
| 附录 | 第87-89页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第89页 |
