| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-46页 |
| 1 肝再生分子机理研究进展 | 第12-17页 |
| ·肝再生的动物模型 | 第12-13页 |
| ·肝脏各种细胞 | 第13-14页 |
| ·肝再生进程的调控 | 第14-17页 |
| 2 肝陷窝细胞研究进展 | 第17-25页 |
| ·肝陷窝细胞的分布与结构特点 | 第18-19页 |
| ·肝陷窝细胞的起源、分化与增殖 | 第19-20页 |
| ·肝陷窝细胞与其表面分子 | 第20-21页 |
| ·肝陷窝细胞与其它细胞 | 第21-22页 |
| ·肝陷窝细胞与肝肿瘤 | 第22-24页 |
| ·肝陷窝细胞与肝纤维化 | 第24页 |
| ·肝陷窝细胞与肝损伤、肝再生 | 第24-25页 |
| 3 骨桥蛋白研究进展 | 第25-30页 |
| ·OPN 的分子结构 | 第25-26页 |
| ·OPN 的基因结构及其转录调控 | 第26-27页 |
| ·OPN 与肝脏发育 | 第27页 |
| ·OPN 与肝再生 | 第27页 |
| ·OPN 与肝病 | 第27-30页 |
| 4 本论文的研究目的和意义 | 第30-31页 |
| 参考文献 | 第31-46页 |
| 第二章 大鼠再生肝的陷窝细胞基因表达谱分析 | 第46-90页 |
| 引言 | 第46-47页 |
| 1 材料和方法 | 第47-62页 |
| ·主要仪器 | 第47页 |
| ·实验动物 | 第47-48页 |
| ·大鼠2/3 肝切除模型制备 | 第48页 |
| ·再生肝的陷窝细胞分离 | 第48-49页 |
| ·再生肝组织的免疫组化分析 | 第49-51页 |
| ·再生肝的陷窝细胞免疫化学分析 | 第51页 |
| ·SDS-PAGE | 第51-52页 |
| ·蛋白免疫印迹 | 第52-53页 |
| ·总RNA 提取与纯化 | 第53-54页 |
| ·cDNA 的合成和纯化 | 第54-56页 |
| ·cRNA 合成和纯化 | 第56-57页 |
| ·cRNA 片段化、杂交液配制 | 第57页 |
| ·芯片杂交、洗脱和扫描 | 第57-58页 |
| ·芯片检测数据获取和整理 | 第58-59页 |
| ·肝再生相关基因的鉴定 | 第59页 |
| ·基因表达谱的功能富集分析 | 第59页 |
| ·基因互作分析 | 第59页 |
| ·实时定量RT-PCR | 第59-62页 |
| 2 结果 | 第62-81页 |
| ·大鼠再生肝分离的陷窝细胞的收率、纯度和成活率 | 第62-63页 |
| ·大鼠肝再生中陷窝细胞的形态结构变化 | 第63-65页 |
| ·大鼠肝再生中陷窝细胞的标志蛋白表达情况 | 第65页 |
| ·大鼠肝再生中陷窝细胞的总RNA 电泳 | 第65-66页 |
| ·cDNA、cRNA 的合成和cRNA 的片段化 | 第66页 |
| ·芯片检测结果的可靠性 | 第66-68页 |
| ·大鼠再生肝的陷窝细胞基因表达总体情况 | 第68-69页 |
| ·大鼠再生肝的陷窝细胞基因表达模式分析 | 第69-71页 |
| ·大鼠再生肝的陷窝细胞功能富集分析 | 第71-73页 |
| ·大鼠再生肝陷窝细胞中免疫、炎症和防御应答相关基因的转录谱变化 | 第73-74页 |
| ·大鼠再生肝陷窝细胞中细胞增殖相关基因的转录谱变化 | 第74-75页 |
| ·大鼠再生肝陷窝细胞中信号通路、胞外分泌活动相关基因的转录谱变化 | 第75-77页 |
| ·大鼠再生肝陷窝细胞中糖、脂、氨基酸等物质代谢相关基因的转录谱变化 | 第77-80页 |
| ·大鼠再生肝陷窝细胞中创伤反应、凝血反应相关基因的转录谱变化 | 第80-81页 |
| 3 讨论 | 第81-85页 |
| 参考文献 | 第85-90页 |
| 第三章 骨桥蛋白OPN 对大鼠肝再生的作用研究 | 第90-146页 |
| 引言 | 第90-91页 |
| 1 材料与方法 | 第91-113页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第91-94页 |
| ·实验动物 | 第94页 |
| ·大鼠2/3 肝切除模型制作 | 第94页 |
| ·opn 基因在大鼠再生肝中的实时定量RT-PCR | 第94-95页 |
| ·opn 基因的克隆 | 第95-100页 |
| ·opn 表达载体的构建 | 第100-102页 |
| ·opn 干涉片段的制备 | 第102-104页 |
| ·opn 干涉载体的构建 | 第104-105页 |
| ·opn 检验载体的构建 | 第105-107页 |
| ·大量质粒的制备 | 第107-109页 |
| ·大鼠肝脏的液压转基因 | 第109-110页 |
| ·转基因后大鼠的死亡率 | 第110页 |
| ·转基因后肝组织的显微结构观察 | 第110-111页 |
| ·转基因后大鼠肝系数检测 | 第111页 |
| ·转基因后大鼠肝再生率检测 | 第111-112页 |
| ·实时定量RT-PCR 检测 | 第112页 |
| ·统计学分析 | 第112-113页 |
| 2 结果 | 第113-139页 |
| ·Real-time RT-PCR 检测内源性opn 在再生肝中的表达 | 第113-114页 |
| ·克隆opn 基因 | 第114-117页 |
| ·表达载体pEGFP-N1-opn 的构建 | 第117-122页 |
| ·干涉载体pGenesil-1.0-opn (313)及pGenesil-1.0-opn (887)的构建 | 第122-124页 |
| ·检验载体pGenesil-1.0-opn(313)-opn、-opn(887)-opn 和-HK-opn 的构建 | 第124-126页 |
| ·opn 检验载体在正常肝内的表达动力学 | 第126-127页 |
| ·opn 表达及干涉载体在正常肝内的表达动力学 | 第127-129页 |
| ·目的质粒的液压转基因时间确定 | 第129-130页 |
| ·转目的质粒后大鼠死亡率 | 第130-132页 |
| ·目的质粒在大鼠再生肝内的表达动力学 | 第132-133页 |
| ·转目的质粒后大鼠肝组织结构变化 | 第133-136页 |
| ·转目的质粒后对大鼠再生肝重的影响 | 第136-137页 |
| ·转目的质粒后对大鼠再生肝系数的影响 | 第137-138页 |
| ·转目的质粒后对大鼠肝再生率的影响 | 第138页 |
| ·转目的质粒后生理活动标志基因的表达变化 | 第138-139页 |
| 3 讨论 | 第139-142页 |
| 参考文献 | 第142-146页 |
| 总结与结论 | 第146-148页 |
| 附录 英文缩略语 | 第148-152页 |
| 致谢 | 第152-154页 |
| 攻读博士学位期间参加的科研项目和发表的论文 | 第154-156页 |
