| 致谢 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 主要符号列表 | 第13-14页 |
| 文献综述 | 第14-24页 |
| 引言 | 第24-25页 |
| 1 材料与方法 | 第25-46页 |
| 1.1 材料 | 第25-28页 |
| 1.1.1 菌株、质粒、细胞及模式生物 | 第25-26页 |
| 1.1.2 引物 | 第26-27页 |
| 1.1.3 主要试剂及试剂盒 | 第27页 |
| 1.1.4 主要仪器设备 | 第27-28页 |
| 1.2 方法 | 第28-46页 |
| 1.2.1 鼠伤寒沙门氏菌gfp融合菌株S.T(ssrAB-gfp)的构建 | 第28-35页 |
| 1.2.2 构建S.T(ΔhilD+ssrAB-gfp) | 第35页 |
| 1.2.3 S.T(pcDNA3.1)、S.T(ssrAB-gfp+pcDNA3.1)、S.T(ΔhilD+ssrAB-gfp+pcDNA3.1)与S.T(ΔhilD+ssrAB-gfp+pcDNA3.1-hilD)菌株的制备 | 第35-36页 |
| 1.2.4 体外环境下观察GFP发光情况 | 第36-37页 |
| 1.2.5 体内环境下观察GFP发光情况 | 第37-38页 |
| 1.2.6 HilD原核表达载体的构建 | 第38-40页 |
| 1.2.7 表达菌株的构建 | 第40-41页 |
| 1.2.8 HilD蛋白的诱导表达 | 第41页 |
| 1.2.9 HilD蛋白的大量表达与纯化 | 第41-43页 |
| 1.2.10 凝胶迁移实验(EMSA) | 第43-46页 |
| 2 结果与分析 | 第46-58页 |
| 2.1 鼠伤寒沙门氏菌gfp融合菌株S.T(ssrAB-gfp)的构建 | 第46-51页 |
| 2.1.1 普通PCR扩增ssrAB基因上下游同源臂序列SN和SC | 第46页 |
| 2.1.2 OverlapPCR拼接ssrAB基因两侧序列 | 第46-47页 |
| 2.1.3 重组质粒pMD19-ssrAB的序列鉴定 | 第47-48页 |
| 2.1.4 普通PCR扩增gfp基因序列结果 | 第48页 |
| 2.1.5 重组质粒pMD19-ssrAB-gfp的序列鉴定 | 第48-49页 |
| 2.1.6 重组质粒pWM91-ssrAB-gfp的序列鉴定 | 第49-50页 |
| 2.1.7 S.T(ssrAB-gfp)菌株构建与鉴定 | 第50-51页 |
| 2.2 S.T(ΔhilD+ssrAB-gfp)菌株构建与鉴定 | 第51页 |
| 2.3 构建S.T(pcDNA3.1)、S.T(ssrAB-gfp+pcDNA3.1)、S.T(ΔhilD+ssrAB-gfp+pcDNA3.1)、S.T(ΔhilD+ssrAB-gfp+pcDNA3.1-hilD)菌株 | 第51-52页 |
| 2.4 体外环境下观察GFP蛋白发光情况 | 第52-53页 |
| 2.5 体内环境下观察GFP蛋白发光情况 | 第53-55页 |
| 2.6 鼠伤寒沙门氏菌HilD蛋白的表达与纯化 | 第55-57页 |
| 2.6.1 普通PCR扩增hilD基因序列及扩增产物的纯化 | 第55页 |
| 2.6.2 pET30a-hilD重组载体的序列鉴定 | 第55-56页 |
| 2.6.3 重组质粒的表达与蛋白纯化 | 第56-57页 |
| 2.7 凝胶阻滞电泳(EMSA)试验鉴定 | 第57页 |
| 2.8 竞争性EMSA实验 | 第57-58页 |
| 3 讨论 | 第58-61页 |
| 3.1 体外环境下HilD对ssrAB基因的调控作用 | 第58页 |
| 3.2 体内环境下HilD对ssrAB基因的调控作用 | 第58-59页 |
| 3.3 HilD结合ssrAB基因的位点 | 第59-61页 |
| 4 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-73页 |
| 个人简介 | 第73-74页 |
| 附录 | 第74-78页 |
