| 内容提要 | 第1-10页 |
| 第1章 绪论 | 第10-27页 |
| ·角质细胞细胞生长因子-2（KGF-2）研究进展 | 第10-14页 |
| ·KGF-2 的发现、结构、来源及生物学特性 | 第10页 |
| ·KGF-2 生物学功能 | 第10-13页 |
| ·KGF-2 的表达与克隆 | 第13页 |
| ·KGF-2 的应用 | 第13-14页 |
| ·生长因子与角膜损伤修复研究进展 | 第14-17页 |
| ·角膜的结构 | 第14-15页 |
| ·生长因子在角膜损伤中的作用 | 第15-17页 |
| ·蛋白质类药物稳定性研究进展 | 第17-21页 |
| ·引起多肽不稳定的原因 | 第18-19页 |
| ·提高蛋白质稳定性的辅料 | 第19-21页 |
| ·国内外基因工程药物研究现状 | 第21-27页 |
| ·美国基因工程药物研究开发现状 | 第21-23页 |
| ·日本生物技术制药发展现状 | 第23页 |
| ·欧洲国家生物技术制药发展现状 | 第23-24页 |
| ·古巴生物技术制药发展现状 | 第24页 |
| ·我国生物制药产业发展现状 | 第24-27页 |
| 第2章 重组人角质细胞生长因子-2 的克隆、表达及纯化 | 第27-52页 |
| ·材料 | 第27-28页 |
| ·细胞株 | 第27页 |
| ·质粒及载体 | 第27页 |
| ·引物 | 第27页 |
| ·其它 | 第27-28页 |
| ·仪器设备 | 第28页 |
| ·溶液的配制 | 第28-31页 |
| ·细胞培养溶液的配制 | 第28页 |
| ·发酵培养基的配制 | 第28-29页 |
| ·纯化缓冲溶液的配制 | 第29-31页 |
| ·方法 | 第31-39页 |
| ·KGF-2 基因的获得 | 第31-33页 |
| ·克隆载体的构建 | 第33-34页 |
| ·重组质粒的转化、筛选及鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组KGF-2 蛋白在大肠杆菌中的诱导表达 | 第35页 |
| ·重组KGF-2 蛋白的发酵 | 第35-36页 |
| ·重组KGF-2 蛋白的纯化 | 第36页 |
| ·重组KGF-2 蛋白的鉴别及检测 | 第36-39页 |
| ·结果 | 第39-46页 |
| ·KGF-2 基因的获得 | 第39-40页 |
| ·重组载体的鉴定 | 第40-42页 |
| ·重组KGF-2 蛋白在大肠杆菌中的诱导表达 | 第42页 |
| ·重组KGF-2 蛋白发酵 | 第42-43页 |
| ·重组KGF-2 纯化 | 第43-44页 |
| ·KGF-2 蛋白westernblot 鉴别 | 第44-45页 |
| ·KGF-2 蛋白质谱分子量 | 第45页 |
| ·KGF-2 蛋白N 端分析 | 第45-46页 |
| ·KGF-2 蛋白含量测定结果 | 第46页 |
| ·讨论与小结 | 第46-52页 |
| ·KGF-2 的克隆表达 | 第46-47页 |
| ·KGF-2 发酵、纯化 | 第47-49页 |
| ·KGF-2 蛋白的鉴别与检测 | 第49-50页 |
| ·小结 | 第50-52页 |
| 第3章 重组人KGF-2 滴眼液制剂的研制 | 第52-58页 |
| ·材料 | 第52页 |
| ·仪器 | 第52页 |
| ·溶液的配制 | 第52-53页 |
| ·20m M 磷酸盐缓冲溶液的配制 | 第52页 |
| ·20m M 柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液的配制 | 第52-53页 |
| ·方法 | 第53-54页 |
| ·KGF-2 滴眼液pH 的选择 | 第53页 |
| ·KGF-2 滴眼液缓冲体系的选择 | 第53页 |
| ·KGF-2 滴眼液制剂处方筛选 | 第53-54页 |
| ·实验结果 | 第54-56页 |
| ·KGF-2 在不同pH 条件下外观及活性结果 | 第54-55页 |
| ·KGF-2 滴眼液不同缓冲体系下澄明度及活性结果 | 第55-56页 |
| ·讨论与小结 | 第56-58页 |
| ·讨论 | 第56-57页 |
| ·小结 | 第57-58页 |
| 第4章 重组人角质细胞生长因子-2 体外生物学活性研究 | 第58-70页 |
| ·材料 | 第58页 |
| ·角膜组织及细胞 | 第58页 |
| ·主要试剂 | 第58页 |
| ·仪器设备 | 第58页 |
| ·溶液的配制 | 第58-59页 |
| ·DMEM 培养液（1640 培养液） | 第58-59页 |
| ·基础培养液 | 第59页 |
| ·完全培养液 | 第59页 |
| ·PBS | 第59页 |
| ·噻唑蓝（MTT）溶液 | 第59页 |
| ·KGF-2 供试品溶液的制备 | 第59页 |
| ·方法 | 第59-63页 |
| ·KGF-2 促NIH/3T3 细胞增殖作用研究 | 第59-60页 |
| ·KGF-2 促角化细胞增殖作用研究 | 第60页 |
| ·KFG-2 对角膜细胞作用研究 | 第60-62页 |
| ·KFG-2 对转染FGFR2Ⅲb 的BaF3 细胞增殖作用研究 | 第62-63页 |
| ·实验结果 | 第63-68页 |
| ·KGF-2 促NIH/3T3 细胞增殖作用研究 | 第63页 |
| ·KGF-2 促角化细胞（Hacat）增殖作用研究 | 第63-64页 |
| ·KFG-2 对角膜细胞作用研究 | 第64-67页 |
| ·KGF-2 对转染FGFR2Ⅲb 的BaF3 细胞增殖作用 | 第67-68页 |
| ·讨论与小结 | 第68-70页 |
| ·讨论 | 第68页 |
| ·小结 | 第68-70页 |
| 第5章 KGF-2 对角膜烧伤的治疗作用研究 | 第70-89页 |
| ·材料 | 第70页 |
| ·药物 | 第70页 |
| ·动物 | 第70页 |
| ·其它试剂 | 第70页 |
| ·实验仪器 | 第70-71页 |
| ·溶液的配制 | 第71页 |
| ·基础培养液 | 第71页 |
| ·完全培养液 | 第71页 |
| ·PBS | 第71页 |
| ·噻唑蓝（MTT）溶液 | 第71页 |
| ·方法 | 第71-73页 |
| ·模型建立 | 第71-72页 |
| ·阳性对照药物选择、剂量设置及试验分组 | 第72页 |
| ·给药方法 | 第72页 |
| ·观测指标及检测方法 | 第72-73页 |
| ·数据及统计学处理 | 第73页 |
| ·实验结果 | 第73-86页 |
| ·角膜半定量损伤修复率（%） | 第73-75页 |
| ·裂隙灯显微镜观察结果 | 第75-77页 |
| ·病理组织学观察结果 | 第77-80页 |
| ·角膜透光率OD 值测定 | 第80-81页 |
| ·离体角膜烧伤斑形态计量学分析结果 | 第81-84页 |
| ·MTT 法检测角膜上皮细胞活性 | 第84-86页 |
| ·讨论与小结 | 第86-89页 |
| ·讨论 | 第86-88页 |
| ·小结 | 第88-89页 |
| 结论 | 第89-90页 |
| 创新点 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-103页 |
| 附图 | 第103-112页 |
| 攻读博士期间发表的学术论文及科研业绩 | 第112-114页 |
| 致谢 | 第114-115页 |
| 中文摘要 | 第115-118页 |
| ABSTRACT | 第118-122页 |
