缩略语表 | 第1-9页 |
中文摘要 | 第9-13页 |
ABSTRACT | 第13-19页 |
前言 | 第19-20页 |
文献回顾 | 第20-41页 |
实验一 RNA 结合蛋白QKI 在结肠细胞分化过程中的表达变化 | 第41-54页 |
引言 | 第41页 |
1 实验材料与主要仪器 | 第41-43页 |
·实验材料 | 第41页 |
·主要试剂 | 第41-42页 |
·主要仪器 | 第42-43页 |
2 实验方法 | 第43-48页 |
·蜡块包埋与免疫组化染色 | 第43-44页 |
·蜡块包埋和切片制备 | 第43页 |
·免疫组织化学检测 | 第43-44页 |
·小鼠肠道组织不同分化状态细胞的分离 | 第44页 |
·细胞培养 | 第44-45页 |
·免疫印迹 | 第45-46页 |
·RT-PCR | 第46-48页 |
3 结果 | 第48-51页 |
·RNA 结合蛋白QKI 在大鼠消化道上皮的表达 | 第48-49页 |
·RNA 结合蛋白QKI 在小鼠结肠上皮不同分化细胞的表达 | 第49-50页 |
·RNA 结合蛋白QKI 在HT29 细胞不同分化模型中的表达 | 第50-51页 |
4 讨论 | 第51-54页 |
实验二 QKI 在结肠肿瘤中的表达异常及其分子机制 | 第54-69页 |
引言 | 第54页 |
1. 实验材料与主要仪器 | 第54-56页 |
·实验材料 | 第54-55页 |
·主要试剂 | 第55-56页 |
·主要仪器 | 第56页 |
2. 实验方法 | 第56-59页 |
·免疫组织化学检测 | 第56页 |
·临床新鲜标本Western blot 检测 | 第56-57页 |
·组织和细胞基因组DNA 的提取 | 第57-58页 |
·基因表达RT-PCR 检测 | 第58页 |
·T-A 克隆与测序 | 第58-59页 |
3 结果 | 第59-66页 |
·RNA 结合蛋白QKI 在正常结肠上皮和结肠癌中的差异表达 | 第59-60页 |
·QKI 在结肠癌中差异表达的机制 | 第60-65页 |
·QKI 启动子甲基化与患者临床信息的相关性 | 第65-66页 |
4 讨论 | 第66-69页 |
实验三 QKI 表达异常对结肠肿瘤细胞增殖和分化的影响 | 第69-83页 |
引言 | 第69页 |
1. 实验材料与主要仪器 | 第69-70页 |
·实验材料 | 第69页 |
·主要试剂 | 第69-70页 |
·主要仪器 | 第70页 |
2. 实验方法 | 第70-75页 |
·细胞转染 | 第70-72页 |
·病毒感染 | 第72页 |
·Western Blot 检测 | 第72页 |
·MTT | 第72-73页 |
·软琼脂克隆形成实验 | 第73页 |
·IAP 活性检测 | 第73-74页 |
·RT-PCR 检测 | 第74页 |
·细胞周期检测 | 第74-75页 |
3 结果 | 第75-80页 |
·RNA 结合蛋白QKI 促进结肠上皮的分化 | 第75-76页 |
·RNA 结合蛋白QKI 可以延长G1 期时相 | 第76-79页 |
·RNA 结合蛋白QKI 抑制结肠癌细胞的生长 | 第79-80页 |
4 讨论 | 第80-83页 |
实验四 QKI 表达异常参与肿瘤细胞生物学行为改变的分子机制 | 第83-100页 |
引言 | 第83页 |
1. 实验材料与主要仪器 | 第83-85页 |
·实验材料 | 第83-84页 |
·主要试剂 | 第84页 |
·主要仪器 | 第84-85页 |
2. 实验方法 | 第85-91页 |
·β-catenin 的mRNA 3’UTR 结构分析 | 第85页 |
·报告系统的构建 | 第85-87页 |
·细胞转染和荧光报告系统检测 | 第87-88页 |
·RNA 免疫共沉淀(RNA-IP) | 第88-89页 |
·细胞免疫荧光 | 第89页 |
·亚细胞组分分离 | 第89-91页 |
·RNA 半衰期检测 | 第91页 |
3 结果 | 第91-97页 |
·p27 在高密度条件下受QKI-5 的表达调节 | 第91-93页 |
·β-catenin mRNA 3’UTR 进化上的保守性分析 | 第93-94页 |
·β-catenin mRNA 3’UTR 受QKI 的转录后调节 | 第94-97页 |
4 讨论 | 第97-100页 |
小结 | 第100-102页 |
参考文献 | 第102-110页 |
个人简历和研究成果 | 第110-112页 |
致谢 | 第112-113页 |