| 缩略语表 | 第1-10页 |
| 中文摘要 | 第10-13页 |
| ABSTRACT | 第13-16页 |
| 前言 | 第16-17页 |
| 文献回顾 | 第17-31页 |
| 一、CDK2AP1 基因的结构特征及表达 | 第17-21页 |
| 二、P12~(CDK2AP1)的作用机理 | 第21-26页 |
| 三、P12~(CDK2AP1)国内研究现状 | 第26-28页 |
| 四、MIRNAS调控基因表达的研究进展 | 第28-31页 |
| 正文 | 第31-104页 |
| 第一部分 CDK2AP1 基因RNAI 慢病毒载体的构建及相关验证 | 第31-83页 |
| 实验一 CDK2AP1 基因RNA 干扰慢病毒载体制备 | 第31-44页 |
| 1 材料 | 第31-33页 |
| ·实验材料 | 第31页 |
| ·主要仪器设备和试剂 | 第31-33页 |
| 2 方法 | 第33-39页 |
| ·载体构建流程图 | 第33页 |
| ·慢病毒载体构建步骤 | 第33-39页 |
| 3 结果 | 第39-44页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第39-42页 |
| ·阳性克隆测序结果分析 | 第42-44页 |
| 实验二 RNAI慢病毒小量包装 | 第44-52页 |
| 1 材料 | 第44-45页 |
| ·实验材料 | 第44页 |
| ·主要仪器设备和试剂 | 第44-45页 |
| 2 方法 | 第45-49页 |
| ·慢病毒包装流程图 | 第45页 |
| ·病毒包装细胞293T 的培养 | 第45-46页 |
| ·Lentivirus 病毒包装 | 第46-47页 |
| ·病毒的收获及浓缩 | 第47-48页 |
| ·Lentivirus 滴度测定 | 第48-49页 |
| 3 实验结果 | 第49-52页 |
| ·滴度照片 | 第49-51页 |
| ·滴度测定结果 | 第51-52页 |
| 实验三 QPCR 内源筛选靶点 | 第52-65页 |
| 1 材料 | 第52-53页 |
| ·实验材料 | 第52页 |
| ·主要仪器设备和试剂 | 第52-53页 |
| 2 方法 | 第53-58页 |
| ·筛靶流程图 | 第53页 |
| ·实验设计 | 第53-54页 |
| ·实验步骤 | 第54-58页 |
| 3 实验结果 | 第58-65页 |
| ·慢病毒感染效果测定 | 第58-60页 |
| ·Quantitative Real-time PCR 数值分析 | 第60-62页 |
| ·有效靶点病毒包装滴度 | 第62-65页 |
| 实验四 QPCR 内源验证靶点有效性 | 第65-71页 |
| 1 材料 | 第65-66页 |
| ·实验材料 | 第65页 |
| ·主要仪器设备和试剂 | 第65-66页 |
| 2 方法 | 第66-68页 |
| ·靶点验证流程图 | 第66页 |
| ·实验设计 | 第66-67页 |
| ·实验步骤 | 第67页 |
| ·统计方法 | 第67-68页 |
| 3 实验结果 | 第68-71页 |
| ·荧光照片 | 第68页 |
| ·Quantitative Real-time PCR 数值分析 | 第68-71页 |
| 实验五 WB 内源验证及生物学效应 | 第71-80页 |
| 1 材料 | 第71-72页 |
| ·实验材料 | 第71页 |
| ·主要仪器设备和试剂 | 第71-72页 |
| 2 方法 | 第72-78页 |
| ·WB 验证靶点流程图 | 第72页 |
| ·实验设计 | 第72-73页 |
| ·实验步骤 | 第73-78页 |
| 3 实验结果 | 第78-80页 |
| ·CDK2AP1 mRNA 表达水平明显降低 | 第78页 |
| ·Western Blot | 第78-79页 |
| ·P12~(CDK2AP1) 下调后促进细胞的增殖能力 | 第79-80页 |
| 讨论 | 第80-83页 |
| 第二部分 MIR-21 下调肿瘤抑制因子P12~(CDK2AP1)表达的体外研究 | 第83-104页 |
| 实验一 CDK2AP1 基因相互作用MIRNAS的预测与验证 | 第83-88页 |
| 1 材料 | 第83-84页 |
| ·实验材料 | 第83页 |
| ·主要仪器设备和试剂 | 第83-84页 |
| 2 方法 | 第84-86页 |
| ·靶点预测的权威生物学软件 | 第84-85页 |
| ·预测miRNAs 的筛选 | 第85页 |
| ·预测靶点的验证 | 第85-86页 |
| 3 结果 | 第86-88页 |
| ·生物信息学软件预测靶点 | 第86页 |
| ·报告基因系统验证作用靶点 | 第86-88页 |
| 实验二 P12~(CDK2AP1)与MIR-21 在细胞系中内源性表达检测及二者关系探讨 | 第88-93页 |
| 1 材料 | 第88-89页 |
| ·实验材料 | 第88页 |
| ·主要仪器设备和试剂 | 第88-89页 |
| 2 方法 | 第89-90页 |
| ·引物设计 | 第89页 |
| ·实验步骤 | 第89-90页 |
| 3 结果 | 第90-93页 |
| ·P12~(CDK2AP1) 与miR-21 内源性表达情况 | 第90-92页 |
| ·miR-21 下调P12~(CDK2AP1) 的表达 | 第92-93页 |
| 实验三 MIR-21 对细胞侵袭和增殖能力的影响 | 第93-101页 |
| 1 材料 | 第93-94页 |
| ·实验材料 | 第93页 |
| ·主要仪器设备和试剂 | 第93-94页 |
| 2 方法 | 第94-98页 |
| ·实验步骤 | 第94-98页 |
| 3 结果 | 第98-101页 |
| ·Transwell 侵袭实验 | 第98页 |
| ·平板克隆形成实验 | 第98-99页 |
| ·MTT 检测 | 第99页 |
| ·细胞周期检测 | 第99-101页 |
| 讨论 | 第101-104页 |
| 小结 | 第104-106页 |
| 参考文献 | 第106-110页 |
| 个人简历和研究成果 | 第110-112页 |
| 致谢 | 第112页 |
