| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略语表 | 第8-18页 |
| 第1章 绪论 | 第18-45页 |
| 1.1 双组分信号转导系统介绍 | 第18-30页 |
| 1.1.1 双组分信号转导系统功能机制 | 第20-21页 |
| 1.1.2 HK蛋白的结构与功能 | 第21-27页 |
| 1.1.2.1 Sensor domain及transmembrane domain的结构与功能 | 第21-22页 |
| 1.1.2.2 Linker domain的结构与功能 | 第22-23页 |
| 1.1.2.3 DHp domain及CA domain的结构与功能 | 第23-27页 |
| 1.1.3 RR蛋白的结构与功能 | 第27-29页 |
| 1.1.3.1 Receiver domain的结构特点 | 第28页 |
| 1.1.3.2 Effector domain的结构特点 | 第28-29页 |
| 1.1.4 针对TCS的抑菌剂研究进展 | 第29-30页 |
| 1.2 木犀草素介绍 | 第30-34页 |
| 1.2.1 木犀草素的抗氧化作用 | 第31页 |
| 1.2.2 木犀草素的抗菌及消除耐药作用 | 第31-32页 |
| 1.2.3 木犀草素的抗炎作用 | 第32页 |
| 1.2.4 木犀草素的抗肿瘤作用 | 第32-34页 |
| 1.2.5 木犀草素的其他药理作用 | 第34页 |
| 1.3 ATP合成酶介绍 | 第34-38页 |
| 1.3.1 F_1F_O-ATP合成酶的结构和功能 | 第35-36页 |
| 1.3.2 F_1F_O-ATP合成酶的结构和功能 | 第36-37页 |
| 1.3.3 V_1V_O-ATP合成酶的结构和功能 | 第37-38页 |
| 1.3.4 ATP合成酶特点总结 | 第38页 |
| 1.4 核磁共振介绍 | 第38-43页 |
| 1.4.1 核磁共振波谱仪的介绍 | 第40-41页 |
| 1.4.2 常见的核磁共振观测参数 | 第41-42页 |
| 1.4.3 常见的核磁共振实验 | 第42页 |
| 1.4.4 常用的核磁共振基本参数 | 第42-43页 |
| 1.5 等温滴定量热实验介绍 | 第43-44页 |
| 1.6 主要研究内容 | 第44-45页 |
| 第2章 组氨酸激酶HK853~(cp)、HK853~(CA)等蛋白质及突变体的表达 | 第45-56页 |
| 2.1 前言 | 第45页 |
| 2.2 试剂与仪器 | 第45-46页 |
| 2.2.1 实验试剂 | 第45-46页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第46页 |
| 2.3 HK853~(cp)、HK853~(CA)及其突变体蛋白质表达前准备 | 第46-49页 |
| 2.3.1 HK853~(cp)、HK853~(CA)及其突变体的重组质粒构建 | 第46-47页 |
| 2.3.2 不同突变体的引物设计 | 第47页 |
| 2.3.3 PCR扩增目的片段 | 第47-48页 |
| 2.3.4 酶切、质粒提取及转化 | 第48-49页 |
| 2.4 HK853~(cp)、HK853~(CA)及其突变体的表达 | 第49页 |
| 2.4.1 非标蛋白的表达 | 第49页 |
| 2.4.2 ~(15)N/~(13)C单标/双标蛋白的表达 | 第49页 |
| 2.5 HK853~(cp)、HK853~(CA)以及其突变体的纯化 | 第49-51页 |
| 2.5.1 HK853~(cp)及其突变体的纯化 | 第49-50页 |
| 2.5.2 HK853~(CA)及其突变体的纯化 | 第50-51页 |
| 2.6 RR468的表达及纯化 | 第51-52页 |
| 2.6.1 RR468蛋白的表达 | 第51页 |
| 2.6.2 RR468蛋白的纯化 | 第51-52页 |
| 2.7 EnvZ~(cp)的纯化及表达 | 第52页 |
| 2.7.1 EnvZ~(cp)蛋白的表达 | 第52页 |
| 2.7.2 EnvZ~(cp)蛋白的纯化 | 第52页 |
| 2.8 结果与讨论 | 第52-55页 |
| 2.8.1 HK853~(cp)蛋白表达纯化结果 | 第52-53页 |
| 2.8.2 HK853~(CA)蛋白表达纯化结果 | 第53-55页 |
| 2.9 结论 | 第55-56页 |
| 第3章 组氨酸激酶HK853~(CA)的主链及侧链归属 | 第56-62页 |
| 3.1 前言 | 第56-57页 |
| 3.2 试剂与仪器 | 第57-58页 |
| 3.2.1 实验试剂 | 第57页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第57-58页 |
| 3.3 实验方法 | 第58-59页 |
| 3.3.1 反应条件 | 第58页 |
| 3.3.2 NMR实验 | 第58页 |
| 3.3.3 HK853~(CA)的主链及侧链归属 | 第58-59页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第59-61页 |
| 3.5 结论 | 第61-62页 |
| 第4章 木犀草素对HK853自磷酸化活性抑制作用机制研究 | 第62-77页 |
| 4.1 前言 | 第62页 |
| 4.2 试剂与仪器 | 第62-63页 |
| 4.2.1 实验试剂 | 第62-63页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第63页 |
| 4.3 实验方法 | 第63-65页 |
| 4.3.1 NMR实验方法 | 第63-64页 |
| 4.3.2 ITC实验方法 | 第64页 |
| 4.3.3 分子模拟方法 | 第64页 |
| 4.3.4 抑菌试验方法 | 第64-65页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第65-75页 |
| 4.4.1 ~(31)P NMR实验结果 | 第65-68页 |
| 4.4.1.1 ~(31)P NMR分析方法的可行性分析 | 第65-67页 |
| 4.4.1.2 ~(31)P NMR分析Lut的抑制活性 | 第67-68页 |
| 4.4.2 ITC定量分析木犀草素与HK853的亲和力 | 第68-69页 |
| 4.4.3 ~(15)N-~1H HSQC滴定分析木犀草素对HK853~(CA)的影响 | 第69-71页 |
| 4.4.4 分子模拟结果 | 第71-72页 |
| 4.4.5 结构类似黄酮类物质功能验证 | 第72-73页 |
| 4.4.6 木犀草素等物质的抑菌作用分析 | 第73-75页 |
| 4.5 结论 | 第75-77页 |
| 第5章 HK853 ATP Lid对自磷酸化活性影响的研究 | 第77-84页 |
| 5.1 前言 | 第77页 |
| 5.2 试剂与仪器 | 第77-78页 |
| 5.2.1 实验试剂 | 第77-78页 |
| 5.2.2 实验仪器 | 第78页 |
| 5.3 实验方法 | 第78页 |
| 5.3.1 ~(15)N-~1H HSQC实验方法 | 第78页 |
| 5.3.2 ITC实验方法 | 第78页 |
| 5.3.3 ~(31)P谱实验方法 | 第78页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第78-83页 |
| 5.4.1 ~(15)N-~1H HSQC实验结果 | 第78-79页 |
| 5.4.2 ITC定量分析突变对亲和力的影响 | 第79-80页 |
| 5.4.3 ~(31)p NMR分析突变对HK853自磷酸化活性的影响 | 第80-83页 |
| 5.5 结论 | 第83-84页 |
| 第6章 HK853的ATP合成功能的研究 | 第84-103页 |
| 6.1 前言 | 第84页 |
| 6.2 试剂与仪器 | 第84-85页 |
| 6.2.1 实验试剂 | 第84-85页 |
| 6.2.2 实验仪器 | 第85页 |
| 6.3 实验方法 | 第85-86页 |
| 6.3.1 ~(31)P谱实验方法 | 第85页 |
| 6.3.2 ~(15)N-~1H HSQC实验方法 | 第85-86页 |
| 6.4 结果与讨论 | 第86-102页 |
| 6.4.1 ADP与HK853~(CA)反应~(31)P NMR实验结果 | 第86-88页 |
| 6.4.2 ~(15)N-~1H HSQC实验观察ADP与HK853~(CA)的反应 | 第88-89页 |
| 6.4.3 HK853~(CA)和HK853~(cp)与ADP反应速率对比 | 第89-90页 |
| 6.4.4 HK853~(H260A)和HK853~(cp)与ADP反应速率对比 | 第90-91页 |
| 6.4.5 HK853 ATP Lid突变对HK853与ADP反应的影响 | 第91-93页 |
| 6.4.6 HK853~(CA)四种突变体(已知影响激酶功能)与ADP反应结果 | 第93-95页 |
| 6.4.7 HK853自磷酸化活性与ATP合成活性对比 | 第95-96页 |
| 6.4.8 基于ADP的HK853→RR468磷酸传递实验结果 | 第96-97页 |
| 6.4.9 HK家族其他蛋白质与ADP反应结果 | 第97-99页 |
| 6.4.10 HK蛋白是否是一种无差别的“磷酸键加工厂”? | 第99-100页 |
| 6.4.11 HK蛋白合成ATP机制推测 | 第100-102页 |
| 6.5 结论 | 第102-103页 |
| 第7章 总结和展望 | 第103-106页 |
| 7.1 总结 | 第103-104页 |
| 7.2 展望 | 第104-106页 |
| 参考文献 | 第106-118页 |
| 附录A 氨基酸中英文对照表 | 第118-120页 |
| 附录B 常用培养基配方及配制过程 | 第120-122页 |
| 附录C 电泳实验中所用到的配方及配制过程 | 第122-124页 |
| 致谢 | 第124-126页 |
| 作者简历及攻读博士学位期间发表的学术论文与研究成果 | 第126-127页 |
