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人晶状体上皮细胞氧化损伤相关microRNA和靶基因的筛选与验证及miR-34a-5p调控氧化损伤的分子机制研究

缩略语表第6-8页
中文摘要第8-10页
英文摘要第10-11页
前言第12-13页
文献回顾第13-32页
第一部分 参与人晶状体上皮细胞氧化损伤关键miRNA的筛选与验证第32-52页
    1 材料第32-33页
        1.1 细胞第32页
        1.2 主要仪器第32-33页
        1.3 实验试剂第33页
    2 实验方法第33-43页
        2.1 细胞复苏第33页
        2.2 人晶状体上皮细胞的培养第33-34页
        2.3 细胞活力的MTT检测第34-35页
        2.4 流式细胞仪测细胞凋亡第35-36页
        2.5 Hoechst33258染色检测细胞凋亡第36-37页
        2.6 差异表达的miRNA筛选第37-39页
        2.7 qRT-PCR验证差异表达的miRNA第39-41页
        2.8 荧光核酸原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)实验验证差异表达的miRNA第41-43页
        2.9 统计学处理第43页
    3 实验结果第43-48页
        3.1 H_2O_2共培养减弱HLE-B3细胞的活力第43-44页
        3.2 H_2O_2处理诱导HLE-B3细胞凋亡第44-45页
        3.3 miRNA基因芯片检测筛选出H_2O_2处理前后差异表达的miRNA第45-46页
        3.4 qRT-PCR验证差异表达的miRNA第46-47页
        3.5 FISH验证差异表达的miRNA第47-48页
    4 讨论第48-52页
第二部分 miRNA靶基因的预测和验证第52-85页
    1 材料第52-53页
        1.1 细胞第52页
        1.2 主要仪器第52页
        1.3 实验试剂第52-53页
    2 实验方法第53-70页
        2.1 细胞的培养第53页
        2.2 miRNA的靶基因预测第53-54页
        2.3 同位素标记相对和绝对定量技术(isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ)联合串联质谱分析第54-59页
        2.4 双荧光素酶报告基因实验第59-66页
        2.5 细胞转染效率评价第66-68页
        2.6 细胞转染后qRT-PCR检测miR-34a-5p及其靶基因的表达水平第68-69页
        2.7 细胞转染后Western blot检测靶蛋白的表达水平第69-70页
        2.8 统计学处理第70页
    3 实验结果第70-81页
        3.1 miR-630,miR-335-3p和miR-34a-5p的靶基因预测和分类第70-73页
        3.2 iTRAQ蛋白质组学分析氧化损伤前后差异表达的蛋白质第73-76页
        3.3 双荧光素酶报告基因实验验证miR-34a-5p对靶基因的调控作用第76-79页
        3.4 细胞转染效率评价第79-80页
        3.5 细胞转染后检测miR-34a-5p对靶基因的调控作用第80-81页
    4 讨论第81-85页
第三部分 miR-34a-5p及其靶基因对HLE-B3细胞在H_2O_2诱导的氧化损伤中功能影响的研究第85-95页
    1 材料第85-86页
        1.1 细胞第85页
        1.2 主要仪器第85页
        1.3 主要试剂第85-86页
    2 实验方法第86-88页
        2.1 细胞的培养第86页
        2.2 细胞转染第86页
        2.3 CCK8检测细胞活力第86-87页
        2.4 qRT-PCR第87页
        2.5 Western blot第87页
        2.6 细胞免疫荧光检测靶蛋白表达水平第87-88页
        2.7 统计学处理第88页
    3 实验结果第88-92页
        3.1 H_2O_2诱导的氧化损伤对HLE-B3细胞内miR-34a-5p/SIRT1和miR-34a-5p/GPX3表达水平的影响第88-90页
        3.2 干扰miR-34a-5p表达水平对HLE-B3细胞在H_2O_2诱导的氧化损伤中功能的影响第90-92页
    4 讨论第92-95页
小结第95-96页
参考文献第96-114页
个人简历和研究成果第114-116页
致谢第116页

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