| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 前言 | 第12-31页 |
| 1 人巨细胞病毒概述 | 第12-24页 |
| 1.1 人巨细胞病毒简介 | 第12页 |
| 1.2 HCMV病毒结构 | 第12-13页 |
| 1.3 病毒基因组 | 第13-14页 |
| 1.4 病毒生活周期 | 第14-18页 |
| 1.4.1 病毒吸附与侵入 | 第15-16页 |
| 1.4.2 病毒基因表达 | 第16-17页 |
| 1.4.3 病毒包装与释放 | 第17-18页 |
| 1.5 人巨细胞病毒与细胞抗病毒天然免疫 | 第18-23页 |
| 1.5.1 细胞天然免疫与模式识别受体 | 第18-21页 |
| 1.5.2 天然免疫对HCMV的识别 | 第21-22页 |
| 1.5.3 HCMV干扰宿主细胞的天然免疫反应 | 第22-23页 |
| 1.6 人巨细胞病毒皮层蛋白pUL | 第23-24页 |
| 2 基于核酶P的抗病毒策略 | 第24-31页 |
| 2.1 RNaseP简介 | 第24-25页 |
| 2.2 基于RNaseP的基因打靶技术 | 第25-26页 |
| 2.3 引导序列的作用位点选择 | 第26-27页 |
| 2.4 M1GS的体外筛选 | 第27-28页 |
| 2.5 EGS和M1GS在抗病毒领域的应用 | 第28-31页 |
| 2.5.1 抗人巨细胞病毒(HCMV) | 第28-29页 |
| 2.5.2 抗人免疫缺陷病毒(HIV) | 第29-30页 |
| 2.5.3 抗乙型肝炎病毒(HBV) | 第30页 |
| 2.5.4 其他病毒 | 第30-31页 |
| 第一章 人巨细胞病毒蛋白pUL23对细胞抗病毒天然免疫的影响 | 第31-58页 |
| 1.1 研究背景 | 第31页 |
| 1.2 实验材料 | 第31-33页 |
| 1.2.1 细胞株；病毒株；菌株 | 第31页 |
| 1.2.2 质粒载体 | 第31-32页 |
| 1.2.3 主要试剂 | 第32-33页 |
| 1.2.4 实验耗材 | 第33页 |
| 1.3 实验方法 | 第33-46页 |
| 1.3.1 分子生物学相关方法 | 第33-37页 |
| 1.3.2 细胞生物学相关方法 | 第37-39页 |
| 1.3.3 蛋白生物学相关方法 | 第39-43页 |
| 1.3.4 病毒学相关方法 | 第43-46页 |
| 1.4 实验结果 | 第46-55页 |
| 1.4.1 缺失UL23的HCMV诱导细胞合成IFNα/β量下降 | 第46-47页 |
| 1.4.2 稳定表达pUL23上调病毒诱导的IFNβ表达 | 第47-50页 |
| 1.4.3 pUL23上调外源DNA诱导的IFNβ表达 | 第50-51页 |
| 1.4.4 pUL23上调病毒诱导的IRF3磷酸化水平和IRF3入核水平 | 第51-52页 |
| 1.4.5 pUL23上调病毒诱导的IFN-I合成与TLR-9信号通路相关 | 第52-54页 |
| 1.4.6 pUL23下调病毒IE1基因表达并影响病毒增殖 | 第54-55页 |
| 1.5 小结与讨论 | 第55-58页 |
| 第二章 工程化核酶P抑制HCMV基因表达和病毒复制的研究 | 第58-72页 |
| 2.1 研究背景 | 第58页 |
| 2.2 实验材料 | 第58-60页 |
| 2.2.1 细胞株/病毒株 | 第58页 |
| 2.2.2 质粒载体 | 第58-59页 |
| 2.2.3 主要试剂 | 第59-60页 |
| 2.3 实验方法 | 第60-65页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第60页 |
| 2.3.2 工程化核酶M1GS和反应底物制备 | 第60-61页 |
| 2.3.3 M1GS体外切割反应 | 第61-62页 |
| 2.3.4 M1GS与底物结合解离常数(K_d)测定 | 第62页 |
| 2.3.5 稳定表达M1GS细胞株构建 | 第62-63页 |
| 2.3.6 Northern Blot检测细胞内RNA含量 | 第63-64页 |
| 2.3.7 Western Blot | 第64页 |
| 2.3.8 HCMV病毒生长曲线测定 | 第64-65页 |
| 2.4 实验结果 | 第65-70页 |
| 2.4.1 M1GS体外高效切割IE1/2 mRNA | 第65-66页 |
| 2.4.2 表达核酶的U251细胞构建 | 第66-67页 |
| 2.4.3 不同核酶对病毒IE1/IE2表达的抑制作用 | 第67-69页 |
| 2.4.4 不同核酶对病毒基因表达和生长的抑制作用 | 第69-70页 |
| 2.5 小结与讨论 | 第70-72页 |
| 第三章 基于核酶P的外部引导序列(EGS)抑制MCMV在动物体内增殖的研究 | 第72-88页 |
| 3.1 研究背景 | 第72页 |
| 3.2 实验材料 | 第72-73页 |
| 3.2.1 细胞株/病毒株/实验动物 | 第72页 |
| 3.2.2 质粒载体 | 第72-73页 |
| 3.2.3 主要试剂 | 第73页 |
| 3.3 实验方法 | 第73-77页 |
| 3.3.1 细胞培养 | 第73页 |
| 3.3.2 EGS及底物ms38制备 | 第73-74页 |
| 3.3.3 体外切割实验 | 第74页 |
| 3.3.4 EGS与底物结合解离常数(Kd)测定 | 第74页 |
| 3.3.5 稳定表达EGS细胞株构建 | 第74页 |
| 3.3.6 RNA/蛋白质表达水平检测 | 第74页 |
| 3.3.7 病毒DNA含量测定 | 第74-75页 |
| 3.3.8 小鼠实验 | 第75-76页 |
| 3.3.9 病毒滴度测定 | 第76-77页 |
| 3.4 实验结果 | 第77-85页 |
| 3.4.1 EGS引导RNase P体外切割MCMV CSP mRNA序列 | 第77-78页 |
| 3.4.2 稳定表达EGS的细胞株构建 | 第78-79页 |
| 3.4.3 EGS在细胞水平对MCMV基因表达和病毒增殖的抑制作用 | 第79-81页 |
| 3.4.4 EGSs抑制MCMV核衣壳组装 | 第81-82页 |
| 3.4.5 EGSs抑制MCMV在动物体内的增殖 | 第82-85页 |
| 3.5 小结与讨论 | 第85-88页 |
| 结论 | 第88-89页 |
| 展望 | 第89-90页 |
| 参考文献 | 第90-104页 |
| 附录 | 第104-111页 |
| 引物序列表 | 第104-107页 |
| 英文缩写词 | 第107-109页 |
| 仪器设备列表 | 第109-110页 |
| 博士期间研究成果 | 第110-111页 |
| 致谢 | 第111页 |
