| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 引言 | 第13-24页 |
| 1.1 肠癌的研究进展 | 第13-15页 |
| 1.1.1 肠癌的类型与发病情况 | 第13-15页 |
| 1.1.2 肠癌患者的治疗与预后 | 第15页 |
| 1.2 缝隙连接蛋白 | 第15-16页 |
| 1.3 缝隙连接蛋白Cx43 | 第16-18页 |
| 1.3.1 Cx43的结构 | 第16-17页 |
| 1.3.2 Cx43的组织分布和生物学功能 | 第17页 |
| 1.3.3 Cx43在肿瘤发生发展中的作用 | 第17-18页 |
| 1.4 缝隙连接GJ | 第18-21页 |
| 1.4.1 GJ的组成与结构 | 第18-19页 |
| 1.4.2 GJ的生物学功能 | 第19-21页 |
| 1.4.2.1 GJ对细胞生长的作用 | 第19页 |
| 1.4.2.2 GJ对器官功能实现发挥的作用 | 第19-20页 |
| 1.4.2.3 GJ在细胞形态维持中的作用 | 第20页 |
| 1.4.2.4 GJ在肿瘤细胞增殖过程中的作用 | 第20页 |
| 1.4.2.5 GJ在肿瘤生长不同环境下所起的作用 | 第20-21页 |
| 1.5 缝隙连接蛋白Cx43突变株 | 第21页 |
| 1.5.1 Cx43 (T154A)的结构与功能 | 第21页 |
| 1.5.2 Cx43 (T154A)在肿瘤发生发展中的作用 | 第21页 |
| 1.5.3 Cx43 (R76W)的结构与功能 | 第21页 |
| 1.5.4 Cx43 (R76W)在肿瘤发生发展中的作用 | 第21页 |
| 1.6 本课题研究的目标、内容与意义 | 第21-24页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第24-48页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-31页 |
| 2.1.1 细胞系、质粒 | 第24页 |
| 2.1.2 工具酶和抗体 | 第24-25页 |
| 2.1.3 主要化学试剂和耗材 | 第25-26页 |
| 2.1.4 细胞培养试剂 | 第26页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第26-27页 |
| 2.1.6 主要溶液配制 | 第27-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-48页 |
| 2.2.1 分子克隆实验 | 第31-34页 |
| 2.2.1.1 重组载体的构建 | 第31-32页 |
| 2.2.1.2 突变载体的构建 | 第32-33页 |
| 2.2.1.3 质粒的中提 | 第33-34页 |
| 2.2.2 细胞生物学实验 | 第34-39页 |
| 2.2.2.1 细胞培养 | 第34-35页 |
| 2.2.2.2 稳定转染细胞株步骤 | 第35-37页 |
| 2.2.2.3 集落形成实验步骤 | 第37页 |
| 2.2.2.4 SRB测定细胞增殖实验步骤 | 第37页 |
| 2.2.2.5 荧光漂白后恢复实验FRAP步骤 | 第37-38页 |
| 2.2.2.6 3D悬浮球形成实验 | 第38页 |
| 2.2.2.7 3D悬浮球糖摄取实验 | 第38-39页 |
| 2.2.3 蛋白水平实验 | 第39-42页 |
| 2.2.3.1 细胞全蛋白抽提 | 第39页 |
| 2.2.3.2 标准曲线的制定 | 第39页 |
| 2.2.3.3 样品浓度测定 | 第39-40页 |
| 2.2.3.4 Western Blot检测蛋白表达 | 第40-42页 |
| 2.2.4 动物水平实验 | 第42-43页 |
| 2.2.4.1 皮下成瘤实验 | 第42-43页 |
| 2.2.4.2 瘤体测量实验 | 第43页 |
| 2.2.5 免疫组化实验 | 第43-47页 |
| 2.2.5.1 3D悬浮球与皮下瘤脱水包埋切片 | 第43-44页 |
| 2.2.5.2 用in situ cell death kit试剂盒和Ki67将切片染色 | 第44-47页 |
| 2.2.6 数据处理 | 第47-48页 |
| 第3章 实验结果 | 第48-71页 |
| 3.1 数据库表明高表达Cx43的肠癌患者与其生存率成负相关 | 第48-49页 |
| 3.1.1 Cx43含量高的肠癌患者其生存率要低 | 第48-49页 |
| 3.2 在3D培养的情况下过表达Cx43促进细胞增殖 | 第49-52页 |
| 3.2.1 过表达Cx43可以增加肠癌细胞间缝隙连接的功能 | 第49-51页 |
| 3.2.2 2D培养下Cx43对肠癌细胞增殖没有影响 | 第51页 |
| 3.2.3 在3D培养的情况下过表达Cx43促进肠癌的增殖 | 第51-52页 |
| 3.3 确定Cx43在3D培养时促进肠癌细胞的增殖是通过GJ | 第52-63页 |
| 3.3.1 Cx43突变株对肠癌细胞增殖无影响 | 第52-59页 |
| 3.3.1.1 Cx43突变株的GJ功能弱于Cx43 | 第52-55页 |
| 3.3.1.2 Cx43突变株在2D培养的情况下对肠癌细胞的增殖无影响 | 第55-57页 |
| 3.3.1.3 3D培养突变株可以逆转Cx43促增殖效应 | 第57-59页 |
| 3.3.2 CBX可以逆转Cx43促增殖效应 | 第59-61页 |
| 3.3.3 球切片表明Cx43组中央坏死区域要少于其余组 | 第61-63页 |
| 3.3.4 球切片表明Cx43组增殖区域要多于其余组 | 第63页 |
| 3.4 裸鼠皮下成瘤验证Cx43促增殖效应是通过缝隙连接 | 第63-67页 |
| 3.4.1 Cx43促进肿瘤的增殖 | 第63-67页 |
| 3.4.2 切片结果表明Cx3组的瘤体坏死区域少于其余组 | 第67页 |
| 3.5 确定3D培养Cx43促增殖的效应是通过GJ传递葡萄糖 | 第67-71页 |
| 3.5.1 过表达Cx43在3D培养时其糖摄取强于其余组 | 第67-70页 |
| 3.5.2 WB结果表明Cx43不会影响GLUT1和GLUT4的表达 | 第70-71页 |
| 第4章 讨论 | 第71-73页 |
| 结论 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
