| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 引言 | 第13-20页 |
| 1.1 坏死样凋亡是一种重要的细胞死亡方式 | 第13-15页 |
| 1.2 坏死样凋亡是TNF-α诱导的SIRS病理的重要原因 | 第15-17页 |
| 1.3 盲肠是体内TNF-α作用下发生坏死样凋亡的主要器官 | 第17-18页 |
| 1.4 急性阑尾炎是一类常见盲肠相关疾病 | 第18页 |
| 1.5 研究意义 | 第18-20页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第20-38页 |
| 2.1 实验动物 | 第20页 |
| 2.2 Rip3和Mlkl基因敲除小鼠基因型的鉴定 | 第20-22页 |
| 2.2.1 苯酚-氯仿法提取小鼠的DNA | 第20-21页 |
| 2.2.2 DNA聚合酶扩增反应(PCR) | 第21页 |
| 2.2.3 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第21-22页 |
| 2.3 3×Flag-mouse TNF-α重组蛋白的提取与纯化 | 第22-28页 |
| 2.3.1 质粒载体 | 第22-23页 |
| 2.3.2 LIC法构建3×Flag-mouse TNF-α重组质粒 | 第23-25页 |
| 2.3.3 Rosetta感受态细胞的制备 | 第25-26页 |
| 2.3.4 3×Flag-mouse TNF-α重组质粒转化感受态细胞 | 第26页 |
| 2.3.5 碱裂解法中量提取质粒DNA | 第26-27页 |
| 2.3.6 3×Flag mTNF-α重组蛋白的提取与纯化 | 第27-28页 |
| 2.4 组织样品做蛋白免疫印迹(Western blot) | 第28-31页 |
| 2.5 小鼠尾静脉注射TNF-α重组蛋白 | 第31页 |
| 2.6 观察小鼠的死活和测定小鼠肛温 | 第31页 |
| 2.7 小鼠盲肠切除手术 | 第31-32页 |
| 2.8 酶联免疫吸附测定(ELISA) | 第32-33页 |
| 2.9 小鼠各脏器病理切片和染色 | 第33-36页 |
| 2.9.1 石蜡切片 | 第33-34页 |
| 2.9.2 冰冻切片 | 第34页 |
| 2.9.3 苏木精-依红染色 | 第34-35页 |
| 2.9.4 免疫组织化学 | 第35-36页 |
| 2.9.5 TUNEL检测 | 第36页 |
| 2.9.6 糖原染色法(Periodic Acid-Schiff stain,PAS) | 第36页 |
| 2.10 血磷检测 | 第36-37页 |
| 2.11 小鼠急性阑尾炎手术 | 第37-38页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第38-62页 |
| 3.1 TNF-α可导致依赖于RIP3和MLKL的小鼠死亡 | 第38页 |
| 3.2 盲肠上皮细胞在TNF-α诱导下发生RIP3和MLKL依赖的坏死样凋亡 | 第38-40页 |
| 3.3 盲肠切除可以减缓TNF-α诱导的SIRS病理现象 | 第40-42页 |
| 3.4 肠道微生物在TNF-α诱导的SIRS病理中的作用 | 第42-45页 |
| 3.5 盲肠切除影响TNF-α诱导的IFN-γ的分泌 | 第45页 |
| 3.6 切除盲肠对各器官损伤的影响 | 第45-56页 |
| 3.6.1 TNF-α对小鼠肝脏没有显著影响 | 第46页 |
| 3.6.2 TNF-α对小鼠的小肠没有显著影响 | 第46-47页 |
| 3.6.3 盲肠切除可缓解TNF-α诱导的轻微肺泡壁增厚情况 | 第47-48页 |
| 3.6.4 盲肠切除可缓解TNF-α诱导的肾脏损伤 | 第48-53页 |
| 3.6.5 盲肠切除可缓解TNF-α诱导的心脏损伤 | 第53-56页 |
| 3.7 抑制坏死样凋亡的发生不会缓解临床急性阑尾炎病的过程 | 第56-59页 |
| 3.8 总结与讨论 | 第59-62页 |
| 参考文献 | 第62-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
