| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 第一章 绪论 | 第10-23页 |
| 1.1 蛋白质的可逆磷酸化 | 第10页 |
| 1.2 激酶 | 第10-12页 |
| 1.2.1 酪氨酸蛋白激酶(TKs) | 第10-11页 |
| 1.2.2 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(STKs) | 第11页 |
| 1.2.3 双底物特异性激酶(Hybrid) | 第11-12页 |
| 1.3 磷酸酶 | 第12页 |
| 1.3.1 磷酸酶的分类 | 第12页 |
| 1.4 新型磷酸酶 | 第12-15页 |
| 1.4.1 PTEN | 第13页 |
| 1.4.2 MTM家族 | 第13-14页 |
| 1.4.3 MTMR14概述 | 第14-15页 |
| 1.5 哮喘研究进展 | 第15-16页 |
| 1.5.1 发病机制 | 第15-16页 |
| 1.5.1.1 气道高反应性（Airway Hyper Reactivity,AHR） | 第15页 |
| 1.5.1.2 免疫-炎症机制 | 第15-16页 |
| 1.5.1.3 神经机制 | 第16页 |
| 1.5.2 电压依赖性钙离子通道（VDCC） | 第16页 |
| 1.5.3 Ca~(2+)与气道高反应性 | 第16页 |
| 1.6 心肌肥厚研究进展 | 第16-20页 |
| 1.6.1 心肌肥厚概述 | 第16-17页 |
| 1.6.2 心肌肥厚模型 | 第17-18页 |
| 1.6.2.1 Ang Ⅱ与心肌肥厚模型 | 第17页 |
| 1.6.2.2 主动脉缩窄术（Aortic Banding,AB）与心肌肥厚模型 | 第17页 |
| 1.6.2.3 动静脉分流（Arteriovenous shunting,AS）与心肌肥厚模型 | 第17-18页 |
| 1.6.3 心肌肥厚相关信号通路 | 第18页 |
| 1.6.4 Ca~(2+)和calcineurin/NFAT信号通路 | 第18页 |
| 1.6.5 MAPK信号通路 | 第18-19页 |
| 1.6.6 PI3K信号通路 | 第19页 |
| 1.6.7 G蛋白偶联受体（G Protein-Coupled Receptors,GPCRs） | 第19-20页 |
| 1.6.8 小G蛋白 | 第20页 |
| 1.6.9 NF-κB信号通路 | 第20页 |
| 1.6.10 心肌肥厚的治疗 | 第20页 |
| 1.7 本文构思 | 第20-23页 |
| 1.7.1 研究背景 | 第20-21页 |
| 1.7.2 研究内容 | 第21页 |
| 1.7.3 研究目的及意义 | 第21-23页 |
| 第二章 实验材料、仪器和试剂 | 第23-30页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第23页 |
| 2.1.2 小鼠饲料和垫料 | 第23-24页 |
| 2.2 实验试剂 | 第24-25页 |
| 2.2.1 常用试剂 | 第24-25页 |
| 2.3 溶液配制 | 第25-28页 |
| 2.3.1 基因型鉴定所需溶液 | 第25-26页 |
| 2.3.2 细胞培养所需溶液 | 第26-27页 |
| 2.3.3 分离气管平滑肌细胞所需溶液 | 第27页 |
| 2.3.4 TILL钙成像所需溶液 | 第27-28页 |
| 2.3.5 膜片钳所需溶液 | 第28页 |
| 2.4 实验仪器及耗材 | 第28-30页 |
| 2.4.1 实验仪器 | 第28-29页 |
| 2.4.2 实验耗材 | 第29-30页 |
| 第三章 实验方法 | 第30-39页 |
| 3.1 小鼠合笼及基因型鉴定 | 第30-31页 |
| 3.2 Real-time PCR | 第31-33页 |
| 3.2.1 组织总RNA的提取 | 第31-32页 |
| 3.2.2 逆转录 | 第32-33页 |
| 3.2.3 Real-time PCR | 第33页 |
| 3.3 获取小鼠气管环 | 第33-34页 |
| 3.4 获取小鼠气管平滑肌 | 第34页 |
| 3.5 分离小鼠单个平滑肌细胞 | 第34页 |
| 3.6 全细胞内钙检测 | 第34页 |
| 3.7 全细胞膜片钳技术 | 第34-35页 |
| 3.7.1 电极拉制 | 第34页 |
| 3.7.2 实验前准备工作 | 第34-35页 |
| 3.7.3 全细胞记录 | 第35页 |
| 3.7.4 全细胞膜片钳技术检测VDLCC电流 | 第35页 |
| 3.8 心肌细胞原代培养 | 第35-37页 |
| 3.8.1 小鼠鼠龄的选择和酶消化液 | 第35-36页 |
| 3.8.2 心脏取出 | 第36页 |
| 3.8.3 消化细胞 | 第36页 |
| 3.8.4 差时贴壁 | 第36页 |
| 3.8.5 接种细胞 | 第36-37页 |
| 3.9 H9C2心肌细胞的培养 | 第37页 |
| 3.9.1 细胞的复苏 | 第37页 |
| 3.9.2 细胞传代与消化 | 第37页 |
| 3.9.3 细胞的冻存 | 第37页 |
| 3.10 免疫荧光 | 第37-39页 |
| 3.10.1 α-actinin抗体免疫荧光染色 | 第37-38页 |
| 3.10.2 PI细胞核染色 | 第38-39页 |
| 第四章 MTMR14对哮喘的影响 | 第39-46页 |
| 4.1 引言 | 第39页 |
| 4.2 实验结果 | 第39-45页 |
| 4.2.1 小鼠基因型鉴定 | 第39-40页 |
| 4.2.2 MTMR14在各个组织的表达情况 | 第40页 |
| 4.2.3 哮喘模型的建立与评价 | 第40-41页 |
| 4.2.4 哮喘小鼠中MTMR14下调表达 | 第41-42页 |
| 4.2.5 MTMR14的缺失导致细胞内钙增加 | 第42-44页 |
| 4.2.6 MTMR14的缺失导致气管平滑肌细胞L-型钙通道功能异常 | 第44-45页 |
| 4.3 小结 | 第45-46页 |
| 第五章 MTMR14对心肌肥厚的影响 | 第46-53页 |
| 5.1 引言 | 第46页 |
| 5.2 实验结果 | 第46-51页 |
| 5.2.1 心肌细胞原代培养 | 第46-47页 |
| 5.2.2 心肌肥厚模型的建立与评价 | 第47页 |
| 5.2.3 心肌肥厚标志物的检测 | 第47-48页 |
| 5.2.4 MTMR14在不同组织和细胞的表达情况 | 第48-49页 |
| 5.2.5 免疫荧光检测MTMR14在H9C2中的表达情况 | 第49页 |
| 5.2.6 H9C2心肌细胞心肌肥厚标志物检测及形态学观察 | 第49-50页 |
| 5.2.7 Ang Ⅱ诱导H9C2细胞表面积增加 | 第50-51页 |
| 5.2.8 心肌肥厚模型中VDLCC电流增加 | 第51页 |
| 5.3 小结 | 第51-53页 |
| 讨论与展望 | 第53-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 附录A 攻读学位期间所发表的学术论文目录 | 第62页 |
