| 中文摘要 | 第9-10页 |
| Abstract | 第10页 |
| 第一章 引言 | 第11-45页 |
| 1. 哺乳动物的性别分化 | 第11-16页 |
| 1.1 性别分化的过程 | 第11-12页 |
| 1.2 参与性别分化的基因 | 第12-16页 |
| 2. 精子发生 | 第16-22页 |
| 2.1 精子发生过程 | 第16-19页 |
| 2.3 精子发生的分子调控 | 第19-22页 |
| 3. 自噬 | 第22-36页 |
| 3.1 自噬的基本分类 | 第22-23页 |
| 3.2 自噬过程及其分子机制 | 第23-25页 |
| 3.3 自噬的分子调控 | 第25-27页 |
| 3.4 自噬的生物学功能 | 第27-36页 |
| 4. 蛋白磷酸酶1的研究进展 | 第36-43页 |
| 4.1 蛋白磷酸酶的分类 | 第36-38页 |
| 4.2 蛋白磷酸酶1的结构及功能 | 第38-41页 |
| 4.3 Ppp1r36的研究现状 | 第41-43页 |
| 5. 本研究的目的与意义 | 第43-45页 |
| 第二章 Ppp1r36基因的表达及功能分析 | 第45-65页 |
| 1. 引言 | 第45-46页 |
| 2. 实验材料与方法 | 第46-55页 |
| 2.1 实验材料 | 第46页 |
| 2.2 常用试剂及其来源 | 第46-47页 |
| 2.3 载体构建 | 第47页 |
| 2.4 组织总RNA的提取 | 第47页 |
| 2.5 RNA的变性与逆转录 | 第47-48页 |
| 2.6 半定量PCR分析 | 第48页 |
| 2.7 实时定量PCR分析 | 第48-49页 |
| 2.8 细胞的传代培养 | 第49页 |
| 2.9 哺乳动物细胞的瞬时转染 | 第49-50页 |
| 2.10 组织切片的免疫荧光定位分析 | 第50页 |
| 2.11 慢病毒的包装 | 第50-51页 |
| 2.12 小鼠藁丸的慢病毒注射 | 第51页 |
| 2.13 小鼠精子涂片制备以及免疫荧光分析 | 第51-52页 |
| 2.14 组织蛋白的提取 | 第52页 |
| 2.15 Western Blot分析 | 第52-53页 |
| 2.16 小鼠性腺的原位杂交(Whole-mount) | 第53-55页 |
| 3. 实验结果 | 第55-63页 |
| 3.1 Ppp1r36在胚胎发育时期性腺中的表达 | 第55-57页 |
| 3.2 Ppp1r36在出生后不同天数睾丸中的表达 | 第57-59页 |
| 3.3 Ppp1r36在精母细胞及精子顶体中的表达 | 第59-60页 |
| 3.4 干涉Ppp1r36影响精子发生及受精率 | 第60-63页 |
| 4. 小结 | 第63-65页 |
| 第三章 Ppp1r36参与细胞自噬 | 第65-79页 |
| 1. 引言 | 第65-66页 |
| 2. 实验材料与方法 | 第66-68页 |
| 2.1 实验材料 | 第66页 |
| 2.2 常用试剂及其来源 | 第66页 |
| 2.3 载体构建 | 第66页 |
| 2.4 细胞的传代培养以及瞬时转染 | 第66-67页 |
| 2.5 细胞蛋白质的提取 | 第67页 |
| 2.6 免疫共沉淀(Co-IP) | 第67页 |
| 2.7 SDS-PAGE以及Western Blot分析 | 第67页 |
| 2.8 细胞的荧光定位分析 | 第67-68页 |
| 3. 实验结果 | 第68-76页 |
| 3.1 Ppp1r36影响自噬 | 第68-70页 |
| 3.2 Ppp1r36促进自噬溶酶体的形成 | 第70-74页 |
| 3.3 Ppp1r36通过Atg16L促进自噬 | 第74-76页 |
| 4. 小结 | 第76-79页 |
| 第四章 Ppp1r36互作蛋白的鉴定 | 第79-89页 |
| 1. 引言 | 第79-80页 |
| 2. 实验材料与方法 | 第80-85页 |
| 2.1 实验材料 | 第80页 |
| 2.2 常用试剂及其来源 | 第80页 |
| 2.3 试剂配制 | 第80-81页 |
| 2.4 “诱饵”bait pGBKT7-Ppp1r36载体的构建 | 第81页 |
| 2.5 CaCl_2法制备大肠杆菌DH5α感受态以及转化 | 第81-82页 |
| 2.6 重组克隆的鉴定 | 第82页 |
| 2.7 重组克隆的测序以及质粒提取 | 第82页 |
| 2.8 利用一步法将pGBKT7-Ppp1r36转化入酵母菌AH109 | 第82-83页 |
| 2.9 酵母的cDNA文库转化 | 第83-84页 |
| 2.10 酵母质粒的提取 | 第84-85页 |
| 2.11 猎物质粒上基因的分析 | 第85页 |
| 3. 实验结果 | 第85-87页 |
| 3.1 pGBKT7-Ppp1r36载体的构建 | 第85页 |
| 3.2 Ppp1r36的酵母双杂交筛选结果 | 第85-86页 |
| 3.3 对所筛猎物的分析以及Ppp1r36功能的推测 | 第86-87页 |
| 4. 小结 | 第87-89页 |
| 研究总结 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-105页 |
| 中英文对照表 | 第105-106页 |
| 致谢 | 第106页 |
