| 致谢 | 第5-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第20-22页 |
| 第一章 文献综述 | 第22-54页 |
| 1 猪着床前胚胎发育的表观遗传修饰调控研究进展 | 第22-47页 |
| 1.1 着床前胚胎发育概况 | 第23-30页 |
| 1.1.1 受精卵形成 | 第23-24页 |
| 1.1.2 卵裂 | 第24-26页 |
| 1.1.3 合子基因组激活 | 第26-27页 |
| 1.1.4 细胞第一次谱系分化 | 第27-30页 |
| 1.2 猪着床前发育过程中主要的表观遗传调控 | 第30-44页 |
| 1.2.1 表观遗传学概念 | 第30-31页 |
| 1.2.2 DNA甲基化与去甲基化 | 第31-34页 |
| 1.2.3 组蛋白修饰 | 第34-40页 |
| 1.2.4 组蛋白变体 | 第40-41页 |
| 1.2.5 表观修饰调控机制 | 第41-44页 |
| 1.3 着床前胚胎表观遗传修饰研究新技术 | 第44-46页 |
| 1.3.1 RNA干扰技术 | 第44页 |
| 1.3.2 间接免疫荧光技术 | 第44-45页 |
| 1.3.3 新一代的测序技术 | 第45页 |
| 1.3.4 CRISPR/Cas9技术 | 第45-46页 |
| 1.4 结语 | 第46-47页 |
| 2 WDR5研究进展 | 第47-53页 |
| 2.1 WDR5的基本结构 | 第47-49页 |
| 2.2 WDR5的生物学功能 | 第49-51页 |
| 2.2.1 WDR5与多能性及重编程 | 第49-50页 |
| 2.2.2 WDR5与细胞分裂和分化 | 第50-51页 |
| 2.2.3 WDR5与表观修饰和染色质重塑 | 第51页 |
| 2.2.4 WDR5其他功能 | 第51页 |
| 2.3 结语 | 第51-53页 |
| 3 研究目的与意义 | 第53-54页 |
| 第二章 猪WDR5基因克隆及生物信息学分析 | 第54-67页 |
| 引言 | 第54页 |
| 2.1 实验材料 | 第54-56页 |
| 2.1.1 生物材料 | 第54页 |
| 2.1.2 试剂与耗材 | 第54-55页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第55-56页 |
| 2.1.4 试剂配制 | 第56页 |
| 2.1.5 生物信息学网站及分析软件 | 第56页 |
| 2.2 实验方法 | 第56-61页 |
| 2.2.1 猪卵巢组织RNA提取及反转录 | 第56-57页 |
| 2.2.2 猪PA囊胚RNA提取及反转录 | 第57-58页 |
| 2.2.3 WDR5编码区序列的PCR扩增 | 第58-59页 |
| 2.2.4 PCR产物纯化 | 第59-60页 |
| 2.2.5 PCR产物与质粒连接、转化 | 第60-61页 |
| 2.2.6 克隆菌落摇菌、菌液PCR、测序 | 第61页 |
| 2.3 结果与分析 | 第61-65页 |
| 2.3.1 猪WDR5基因编码区序列克隆 | 第61-64页 |
| 2.3.2 猪WDR5基因序列分析 | 第64-65页 |
| 2.3.3 WDR5在不同物种之间的分子进化关系 | 第65页 |
| 2.4 讨论 | 第65-66页 |
| 2.5 小结 | 第66-67页 |
| 第三章 WDR5在猪组织、细胞及着床前胚胎中表达模式 | 第67-80页 |
| 引言 | 第67页 |
| 3.1 实验材料 | 第67-71页 |
| 3.1.1 生物材料 | 第67页 |
| 3.1.2 仪器设备 | 第67-68页 |
| 3.1.3 试剂与耗材 | 第68-71页 |
| 3.2 实验方法 | 第71-74页 |
| 3.2.1 猪胎儿成纤维细胞(PEF)培养 | 第71页 |
| 3.2.2 猪卵母细胞的体外成熟(IVM) | 第71-72页 |
| 3.2.3 猪卵母细胞的孤雌激活(PA)及胚胎体外培养(IVC) | 第72页 |
| 3.2.4 猪卵母细胞及各期胚胎收集时间 | 第72页 |
| 3.2.5 猪各组织RNA提取及反转录 | 第72-73页 |
| 3.2.6 猪不同细胞的RNA提取及反转录 | 第73页 |
| 3.2.7 猪卵母细胞及各期胚胎RNA提取及反转录 | 第73页 |
| 3.2.8 实时荧光定量PCR(qPCR) | 第73页 |
| 3.2.9 细胞、卵母细胞及胚胎的间接免疫荧光染色 | 第73-74页 |
| 3.2.10 数据统计分析 | 第74页 |
| 3.3 结果与分析 | 第74-77页 |
| 3.3.1 WDR5在猪不同组织中的表达 | 第74-75页 |
| 3.3.2 WDR5/WDR5在猪不同细胞中的表达 | 第75-76页 |
| 3.3.3 WDR5/WDR5在猪卵母细胞及各期着床前胚胎中的表达 | 第76-77页 |
| 3.4 讨论 | 第77-78页 |
| 3.4.1 WDR5在猪主要组织及不同分化程度细胞中的表达 | 第77-78页 |
| 3.4.2 WDR5在猪卵母细胞和各期植入前胚胎中的表达模式 | 第78页 |
| 3.5 小结 | 第78-80页 |
| 第四章 WDR5在猪着床前胚胎发育过程中的功能 | 第80-93页 |
| 引言 | 第80-81页 |
| 4.1 实验材料 | 第81-83页 |
| 4.1.1 生物材料 | 第81页 |
| 4.1.2 仪器设备 | 第81页 |
| 4.1.3 试剂与耗材 | 第81-83页 |
| 4.2 实验方法 | 第83-86页 |
| 4.2.1 显微操作针的制备 | 第83页 |
| 4.2.2 显微操作碟制作 | 第83页 |
| 4.2.3 猪卵母细胞IVM | 第83页 |
| 4.2.4 猪MII期卵母细胞显微注射siRNA | 第83页 |
| 4.2.5 猪卵母细胞PA和IVC | 第83页 |
| 4.2.6 猪MII期卵母细胞体外受精(IVF) | 第83-84页 |
| 4.2.7 猪各期胚胎RNA提取及反转录 | 第84页 |
| 4.2.8 胚胎样品qPCR | 第84页 |
| 4.2.9 胚胎样品间接免疫荧光染色 | 第84页 |
| 4.2.10 猪囊胚总细胞数计数 | 第84页 |
| 4.2.11 荧光信号强度半定量分析 | 第84页 |
| 4.2.12 猪4-细胞胚胎蛋白质免疫印记(WB) | 第84-85页 |
| 4.2.13 数据统计方法 | 第85-86页 |
| 4.3 结果与分析 | 第86-91页 |
| 4.3.1 猪MII期卵母细胞显微注射效率验证 | 第86页 |
| 4.3.2 WDR5-siRNA在猪着床前胚胎中的干扰效率 | 第86-88页 |
| 4.3.3 WDR5在猪着床前胚胎发育过程中的功能 | 第88-91页 |
| 4.4 讨论 | 第91-92页 |
| 4.5 小结 | 第92-93页 |
| 第五章 WDR5影响猪着床前胚胎发育的作用机制 | 第93-110页 |
| 引言 | 第93页 |
| 5.1 实验材料 | 第93-94页 |
| 5.1.1 生物材料 | 第93页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第93页 |
| 5.1.3 试剂与耗材 | 第93-94页 |
| 5.2 实验方法 | 第94-95页 |
| 5.2.1 猪卵母细胞的IVM | 第94页 |
| 5.2.2 猪卵母细胞的PA及IVC | 第94页 |
| 5.2.3 猪卵母细胞及各期胚胎的收集 | 第94页 |
| 5.2.4 猪MII期卵母细胞显微注射 | 第94页 |
| 5.2.5 胚胎样品的间接免疫荧光染色 | 第94页 |
| 5.2.6 猪囊胚期胚胎细胞凋亡染色(TUNEL) | 第94页 |
| 5.2.7 猪卵母细胞及各期胚胎RNA提取及反转录 | 第94页 |
| 5.2.8 胚胎样品qPCR | 第94-95页 |
| 5.2.9 胚胎样品间接免疫荧光染色 | 第95页 |
| 5.2.10 囊胚总细胞数计数 | 第95页 |
| 5.2.11 胚胎样品间接免疫荧光染色 | 第95页 |
| 5.2.12 荧光信号强度半定量分析 | 第95页 |
| 5.2.13 数据统计方法 | 第95页 |
| 5.3 结果与分析 | 第95-106页 |
| 5.3.1 WDR5介导细胞凋亡影响猪着床前胚胎发育 | 第95-96页 |
| 5.3.2 WDR5调控多能性基因的表达影响猪着床前胚胎发育 | 第96-97页 |
| 5.3.3 WDR5通过调控表观遗传修饰影响猪着床前胚胎发育 | 第97-103页 |
| 5.3.4 WDR5通过维持基因组完整性影响猪着床前胚胎发育 | 第103-105页 |
| 5.3.5 WDR5通过调控细胞周期相关基因的表达影响猪着床前胚胎发育 | 第105-106页 |
| 5.4 讨论 | 第106-109页 |
| 5.4.1 WDR5对猪囊胚期胚胎细胞凋亡的影响 | 第106-107页 |
| 5.4.2 WDR5与多能性基因的关系 | 第107页 |
| 5.4.3 WDR5调控猪着床前胚胎的表观遗传修饰 | 第107-108页 |
| 5.4.4 WDR5维持猪囊胚期胚胎基因组的完整性 | 第108-109页 |
| 5.4.5 WDR5与猪囊胚期胚胎细胞周期的关系 | 第109页 |
| 5.5 小结 | 第109-110页 |
| 全文结论 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-137页 |
| 附录 | 第137-143页 |
| 附表 | 第137-141页 |
| 附图 | 第141-143页 |
| 个人简介 | 第143-144页 |
