| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-23页 |
| 第一节 鱼类抗寒性状的研究进展 | 第12-15页 |
| 1.低温对鱼类的影响 | 第12-15页 |
| 1.1 低温对摄食生长行为和组织形态的影响 | 第12-13页 |
| 1.2 低温对生理生化指标的影响 | 第13-14页 |
| 1.3 低温对免疫和繁殖的影响 | 第14页 |
| 1.4 低温对基因表达调控的影响 | 第14-15页 |
| 第二节 鱼类抗寒相关基因的研究进展 | 第15-17页 |
| 第三节 分子技术在构建鱼类耐寒品系育种工作中的应用 | 第17-18页 |
| 1.分子标记技术在构建鱼类耐寒品系育种工作中的应用 | 第17页 |
| 2.转基因技术在构建鱼类耐寒品系育种工作中的应用 | 第17-18页 |
| 第四节 热休克蛋白70和脂肪酸去饱和酶家族的低温适应机制 | 第18-21页 |
| 1 热休克蛋白70的低温适应机制 | 第18-20页 |
| 1.1 热休克蛋白70简介 | 第18-19页 |
| 1.2 低温适应机制 | 第19-20页 |
| 2 脂肪酸去饱和酶的低温适应机制 | 第20-21页 |
| 2.1 脂肪酸去饱和酶简介 | 第20页 |
| 2.2 低温适应机制 | 第20-21页 |
| 第五节 卵形鲳鲹生物学特性 | 第21-22页 |
| 第六节 本研究的目的与意义 | 第22-23页 |
| 第二章 卵形鲳鲹候选耐寒基因的克隆及生物信息学分析 | 第23-65页 |
| 第一节 HSP70和HSC70基因的克隆及生物信息学分析 | 第23-48页 |
| 1.实验材料 | 第23-25页 |
| 1.1 实验用鱼 | 第23页 |
| 1.2 质粒和受体菌 | 第23页 |
| 1.3 主要试剂和耗材 | 第23页 |
| 1.4 主要溶液和试剂的配制 | 第23-24页 |
| 1.5 主要实验仪器 | 第24页 |
| 1.6 生物信息学预测网址及软件 | 第24-25页 |
| 2.实验方法 | 第25-35页 |
| 2.1 肝脏中总RNA的提取 | 第25页 |
| 2.2 cDNA一链的制备 | 第25-26页 |
| 2.3 3’RACE一链cDNA的合成 | 第26-27页 |
| 2.4 5'RACE一链cDNA的合成 | 第27-29页 |
| 2.5 HSP70和HSC70基因的克隆 | 第29-35页 |
| 3.结果与分析 | 第35-46页 |
| 3.1 总RNA的提取 | 第35-38页 |
| 3.3 HSC70基因的克隆结果及序列分析 | 第38-41页 |
| 3.4 HSP70和HSC70蛋白的生物信息学分析 | 第41-45页 |
| 3.5 HSP70和HSC70蛋白家族的系统进化树构建 | 第45-46页 |
| 4.讨论 | 第46-48页 |
| 第二节 △6FAD和△9FAD基因的克隆及生物信息学分析 | 第48-65页 |
| 1 实验材料 | 第48页 |
| 2 实验方法 | 第48-52页 |
| 2.1 肝脏中总RNA的提取 | 第48页 |
| 2.2 cDNA模板的制备 | 第48页 |
| 2.3 △6FAD和△9FAD基因的克隆 | 第48-52页 |
| 3.结果及分析 | 第52-63页 |
| 3.1 △6FAD的克隆结果及序列分析 | 第52-57页 |
| 3.2 △9FAD的克隆结果及序列分析 | 第57-63页 |
| 4 讨论 | 第63-65页 |
| 第三章 卵形鲳鲹耐寒候选基因mRNA的组织差异性表达分析 | 第65-73页 |
| 1 实验材料 | 第65-66页 |
| 1.1 实验用鱼 | 第65页 |
| 1.2 实验试剂 | 第65页 |
| 1.3 实验仪器 | 第65-66页 |
| 2 实验方法 | 第66-68页 |
| 2.1 总RNA提取 | 第66页 |
| 2.2 总RNA的DNaseI处理和一链cDNA的合成 | 第66-67页 |
| 2.3 荧光定量PCR引物的设计 | 第67页 |
| 2.4 荧光定量PCR | 第67-68页 |
| 2.5 数据处理 | 第68页 |
| 3 结果与分析 | 第68-70页 |
| 3.1 HSP70和HSC70基因的组织差异性表达 | 第68-69页 |
| 3.2 △6FAD和△9FAD基因的组织差异性表达 | 第69-70页 |
| 4 讨论 | 第70-73页 |
| 4.1 卵形鲳鲹HSP70和HSC70基因mRNA的组织表达差异 | 第70-71页 |
| 4.2 卵形鲳鲹△6FAD和△9FAD基因mRNA的组织表达差异 | 第71-73页 |
| 第四章 低温胁迫对卵形鲳鲹候选耐寒基因表达的影响 | 第73-83页 |
| 1.实验材料 | 第73-74页 |
| 1.1 实验用鱼 | 第73页 |
| 1.2 实验试剂 | 第73页 |
| 1.3 实验仪器 | 第73-74页 |
| 2 实验方法 | 第74页 |
| 2.1 卵形鲳鲹的低温处理 | 第74页 |
| 2.2 取样及总RNA提取 | 第74页 |
| 2.3 DnaseI处理总RNA及一链cDNA的合成 | 第74页 |
| 2.4 荧光定量PCR引物的设计 | 第74页 |
| 2.5 荧光定量PCR | 第74页 |
| 2.6 数据分析 | 第74页 |
| 3 结果分析 | 第74-79页 |
| 3.1 HSP70和HSC70基因不同低温下的表达 | 第74-75页 |
| 3.2 △6FAD和△9FAD基因不同低温下的表达 | 第75-76页 |
| 3.3 HSP70和HSC70基因不同低温下的时序表达 | 第76-78页 |
| 3.4 △6FAD和△9FAD基因不同低温下的时序表达 | 第78-79页 |
| 4 讨论 | 第79-83页 |
| 4.1 低温对HSP70和HSC70基因表达量的影响 | 第79-80页 |
| 4.2 低温对△6FAD和△9FAD基因表达量的影响 | 第80-83页 |
| 结论 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
| 作者简介 | 第101-102页 |
| 导师简介 | 第102页 |
