| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略表 | 第16-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-33页 |
| 1.1 丙型肝炎的流行与危害 | 第17页 |
| 1.2 HCV基因组与增殖周期 | 第17-19页 |
| 1.2.1 HCV的基因组 | 第17-18页 |
| 1.2.2 HCV的增殖周期 | 第18-19页 |
| 1.3 HCV病毒培养体系 | 第19页 |
| 1.4 丙型肝炎治疗方法 | 第19-20页 |
| 1.5 HCV药物治疗靶点 | 第20-26页 |
| 1.5.1 HCV直接抗病毒药物(DAAs) | 第20-24页 |
| 1.5.2 中草药提取物抗HCV | 第24-25页 |
| 1.5.3 HCV的潜在药物靶点 | 第25-26页 |
| 1.6 抗HCV药物筛选体系 | 第26-31页 |
| 1.6.1 HCV靶向药物筛选体系 | 第26-27页 |
| 1.6.2 HCV非靶向药物研究体系 | 第27-31页 |
| 1.7 本研究目的和意义 | 第31-32页 |
| 1.8 本研究技术路线 | 第32-33页 |
| 第二章 待测化合物抗HCV活性的初筛 | 第33-49页 |
| 2.1 引言 | 第33-34页 |
| 2.2 材料与仪器 | 第34-35页 |
| 2.3 实验方法 | 第35-41页 |
| 2.3.1 肝癌细胞系Huh 7.5.1的培养 | 第35-36页 |
| 2.3.2 HCV感染性病毒粒子的培养 | 第36页 |
| 2.3.3 Real Time RT-PCR技术检测HCV病毒载量 | 第36-40页 |
| 2.3.4 待测化合物细胞毒性检测 | 第40页 |
| 2.3.5 待测化合物病毒抑制作用检测 | 第40-41页 |
| 2.3.6 待测化合物选择指数(SI值)测定 | 第41页 |
| 2.4 实验结果 | 第41-47页 |
| 2.4.1 Real Time RT-PCR结果标准 | 第41-42页 |
| 2.4.2 重组人干扰素和RBV抗HCV的活性检测结果 | 第42-43页 |
| 2.4.3 阳性药物环孢素A类化合物抗HCV的活性检测结果 | 第43-45页 |
| 2.4.4 待测新药抗HCV的活性检测结果 | 第45-46页 |
| 2.4.5 化合物抗HCV的IC_(50)、EC_(50)和SI值 | 第46-47页 |
| 2.5 讨论 | 第47-48页 |
| 2.6 小结 | 第48-49页 |
| 第三章 待测化合物抗HCV活性的复筛 | 第49-62页 |
| 3.1 引言 | 第49-50页 |
| 3.2 材料与仪器 | 第50-52页 |
| 3.2.1 主要仪器 | 第50页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第50-51页 |
| 3.2.3 试剂的配制 | 第51-52页 |
| 3.3 实验方法 | 第52-55页 |
| 3.3.1 药物抗HCV活性作用的时间依赖性 | 第52页 |
| 3.3.2 药物抗HCV NS5A蛋白作用 | 第52-54页 |
| 3.3.3 人血清对药物抗HCV活性的影响 | 第54页 |
| 3.3.4 不同纯度NEW-C抗HCV活性作用的复筛 | 第54-55页 |
| 3.4 结果 | 第55-60页 |
| 3.4.1 药物抗HCV活性作用的时间依赖 | 第55页 |
| 3.4.2 药物抗HCV NS5A蛋白作用 | 第55-56页 |
| 3.4.3 人血清对药物抗HCV活性的影响 | 第56-58页 |
| 3.4.4 不同纯度的受试药物NEW的抗HCV活性作用 | 第58-59页 |
| 3.4.5 受试药物NEW和CsA的不同批次抗HCV活性研究 | 第59-60页 |
| 3.5 讨论 | 第60-61页 |
| 3.6 小结 | 第61-62页 |
| 第四章 HCV1b亚基因组复制子药物筛选体系的构建与验证 | 第62-90页 |
| 4.1 引言 | 第62-63页 |
| 4.2 材料与仪器 | 第63-65页 |
| 4.2.1 主要仪器 | 第63-64页 |
| 4.2.2 主要试剂 | 第64页 |
| 4.2.3 试剂的配制 | 第64-65页 |
| 4.3 实验方法 | 第65-80页 |
| 4.3.1 APP76(Con1)质粒的改造 | 第65-71页 |
| 4.3.2 改造后质粒的转化与验证 | 第71-74页 |
| 4.3.3 改造后质粒的线性化与体外转录 | 第74-77页 |
| 4.3.4 体外转录RNA转染Huh 7.5.1细胞株 | 第77-78页 |
| 4.3.5 亚复制子细胞的筛选 | 第78页 |
| 4.3.6 亚复制子细胞系的验证 | 第78-80页 |
| 4.4 实验结果 | 第80-87页 |
| 4.4.1 APP76(Con1)质粒的改造 | 第80-81页 |
| 4.4.2 改造后质粒的转化与验证 | 第81-84页 |
| 4.4.3 改造后质粒的线性化与体外转录 | 第84-85页 |
| 4.4.4 亚复制子细胞的筛选 | 第85-86页 |
| 4.4.5 亚复制子细胞系的验证 | 第86-87页 |
| 4.5 讨论 | 第87-89页 |
| 4.6 小结 | 第89-90页 |
| 第五章 结论 | 第90-92页 |
| 5.1 基于J6-JFH/Huh 7.5.1 HCV培养的抗HCV药物筛选体系成功筛选环孢素A类化合物 | 第90页 |
| 5.2 进行了待测药物NEW抗HCV活性的进一步研究 | 第90-91页 |
| 5.3 成功构建了HCV 1b亚基因组复制子体系 | 第91-92页 |
| 第六章 不足与展望 | 第92-93页 |
| 致谢 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-101页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表论文目录 | 第101-102页 |
| 附录B 其他需要说明的内容 | 第102页 |
