| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 引言 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-16页 |
| ·抗菌肽的研究进展 | 第10-12页 |
| ·抗菌肽的发现 | 第10页 |
| ·抗菌肽的结构特性及分类 | 第10-11页 |
| ·抗菌肽的作用机理 | 第11-12页 |
| ·抗菌肽的应用 | 第12页 |
| ·两栖类皮肤抗菌肽的研究进展 | 第12-15页 |
| ·两栖类皮肤抗菌肽的结构特点和防御机制 | 第12-13页 |
| ·两栖类皮肤抗菌肽的基因工程研究进展 | 第13-14页 |
| ·融合蛋白中的标签蛋白技术 | 第14-15页 |
| ·本研究的意义和内容 | 第15-16页 |
| 2 串联融合表达载体的构建 | 第16-24页 |
| ·实验材料 | 第16页 |
| ·实验方法 | 第16-20页 |
| ·目的基因的人工合成 | 第16-17页 |
| ·目的基因与克隆载体的连接 | 第17页 |
| ·PCR 法检测阳性克隆及测序 | 第17页 |
| ·目的基因的双酶切 | 第17页 |
| ·表达型载体pET-42a(+)的双酶切 | 第17-18页 |
| ·目的基因片段与pET-42a(+)酶切片段的连接 | 第18页 |
| ·重组表达载体的转化及测序鉴定 | 第18-19页 |
| ·pET-42a(+)/6temporin-1CEa 质粒的提取 | 第19-20页 |
| ·结果与分析 | 第20-22页 |
| ·重组克隆载体测序结果 | 第20页 |
| ·重组表达载体构建结果 | 第20-22页 |
| ·讨论 | 第22-24页 |
| 3 重组抗菌肽temporin-1CEa 表达条件的筛选 | 第24-31页 |
| ·实验材料 | 第24页 |
| ·实验方法 | 第24-25页 |
| ·外源目的蛋白的诱导表达 | 第24页 |
| ·诱导条件的筛选 | 第24-25页 |
| ·结果与分析 | 第25-29页 |
| ·外源目的蛋白诱导表达结果 | 第25-26页 |
| ·不同IPTG 浓度诱导表达结果 | 第26页 |
| ·不同时间诱导表达结果 | 第26-27页 |
| ·不同温度诱导表达结果 | 第27页 |
| ·不同pH 诱导表达结果 | 第27-29页 |
| ·优化条件下诱导表达结果 | 第29页 |
| ·讨论 | 第29-31页 |
| 4 串联融合表达蛋白的纯化 | 第31-40页 |
| ·实验材料 | 第31页 |
| ·实验方法 | 第31-33页 |
| ·重组蛋白的GST 亲和层析 | 第31-32页 |
| ·Xa 因子柱上酶切纯化蛋白 | 第32页 |
| ·重组蛋白的Ni 柱亲和层析纯化 | 第32-33页 |
| ·Xa 柱外去除目的蛋白的融合标签 | 第33页 |
| ·酶切产物的抗菌活性鉴定 | 第33页 |
| ·结果与分析 | 第33-38页 |
| ·GST 亲和层析纯化结果 | 第33-34页 |
| ·Xa 因子柱上酶切结果 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白的Ni 柱亲和层析纯化 | 第35-36页 |
| ·Xa 柱外去除目的蛋白的融合标签 | 第36-38页 |
| ·酶切产物的活性鉴定结果 | 第38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| 结论 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-45页 |
| 附录A 测序结果 | 第45-47页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第47-48页 |
| 致谢 | 第48页 |
