| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 绪论 | 第13-32页 |
| 1.1 1-烷醇和1,n-烷二醇简介 | 第13页 |
| 1.2 1-烷醇和1,n-烷二醇的应用 | 第13-14页 |
| 1.2.1 1-丁醇 | 第13页 |
| 1.2.2 1-戊醇 | 第13-14页 |
| 1.2.3 1,4-丁二醇 | 第14页 |
| 1.2.4 1,5-戊二醇 | 第14页 |
| 1.2.5 1,6-己二醇 | 第14页 |
| 1.3 多羟基化合物简介 | 第14-16页 |
| 1.3.1 葡萄糖 | 第15页 |
| 1.3.2 木糖 | 第15页 |
| 1.3.3 赤藓糖醇 | 第15-16页 |
| 1.3.4 甘油 | 第16页 |
| 1.4 利用多羟基化合物生产1-烷醇和1,n-烷二醇 | 第16-20页 |
| 1.4.1 1-丙醇的生物合成途径 | 第16-17页 |
| 1.4.2 1,3-丙二醇的生物合成途径 | 第17页 |
| 1.4.3 1,4-丁二醇的生物合成途径 | 第17-19页 |
| 1.4.4 1-戊醇生物合成途径 | 第19-20页 |
| 1.5 甘油脱水酶和二醇脱水酶 | 第20-26页 |
| 1.5.1 甘油脱水酶和二醇脱水酶的结构 | 第21-22页 |
| 1.5.2 甘油脱水酶和二醇脱水酶的催化机理 | 第22页 |
| 1.5.3 甘油脱水酶和二醇脱水酶激活因子 | 第22-23页 |
| 1.5.4 甘油脱水酶和二醇脱水酶的蛋白质工程 | 第23-26页 |
| 1.6 酶的非特异性 | 第26-28页 |
| 1.6.1 酶的非特异性的机理 | 第26-28页 |
| 1.6.2 酶的非特异性在蛋白质工程的应用 | 第28页 |
| 1.7 酶的逆向进化 | 第28-29页 |
| 1.8 本课题的研究目的和意义 | 第29-32页 |
| 1.8.1 研究目的 | 第29-30页 |
| 1.8.2 研究意义 | 第30页 |
| 1.8.3 研究内容 | 第30-32页 |
| 第2章 甘油脱水酶和二醇脱水酶催化四碳多元醇的研究 | 第32-59页 |
| 2.1 引言 | 第32页 |
| 2.2 材料与方法 | 第32-44页 |
| 2.2.1 菌株、质粒和引物 | 第32-35页 |
| 2.2.2 仪器设备 | 第35-36页 |
| 2.2.3 化学试剂 | 第36-37页 |
| 2.2.4 生物学试剂 | 第37页 |
| 2.2.5 培养基 | 第37-38页 |
| 2.2.6 无缝克隆 | 第38-40页 |
| 2.2.7 建立赤藓糖醇、1,2,4-丁三醇和1,4-丁二醇的GC-MS检测方法 | 第40-41页 |
| 2.2.8 肺炎克雷伯氏菌催化赤藓糖醇的能力 | 第41-42页 |
| 2.2.9 甘油脱水酶和二醇脱水酶的克隆 | 第42-43页 |
| 2.2.10 检测甘油脱水酶和二醇脱水酶催化多元醇的酶活 | 第43页 |
| 2.2.11 检测粗酶液催化的反应体系的产物 | 第43页 |
| 2.2.12 甘油脱水酶和二醇脱水酶的定点突变 | 第43-44页 |
| 2.2.13 检测甘油脱水酶和二醇脱水酶突变体催化多元醇的酶活 | 第44页 |
| 2.2.14 全细胞催化验证各突变体催化四碳多元醇的能力 | 第44页 |
| 2.3 实验结果 | 第44-56页 |
| 2.3.1 建立赤藓糖醇、1,2,4-丁三醇和1,4-丁二醇的检测方法 | 第44-45页 |
| 2.3.2 肺炎克雷伯氏菌催化赤藓糖醇的能力 | 第45-46页 |
| 2.3.3 甘油脱水酶和二醇脱水酶的克隆 | 第46-49页 |
| 2.3.4 检测E.coli重组菌的催化赤藓糖醇的能力 | 第49-50页 |
| 2.3.5 二醇脱水酶突变体的催化四碳多元醇的能力 | 第50-54页 |
| 2.3.6 甘油脱水酶突变体的催化四碳多元醇的能力 | 第54-56页 |
| 2.4 讨论 | 第56-57页 |
| 2.5 本章小结 | 第57-59页 |
| 第3章 甘油脱水酶和二醇脱水酶催化长碳链多元醇的研究 | 第59-77页 |
| 3.1 引言 | 第59页 |
| 3.2 材料与方法 | 第59-63页 |
| 3.2.1 菌株、质粒和引物 | 第59页 |
| 3.2.2 仪器设备 | 第59页 |
| 3.2.3 化学试剂 | 第59-60页 |
| 3.2.4 分子生物学试剂 | 第60页 |
| 3.2.5 培养基 | 第60页 |
| 3.2.6 甘油脱水酶的表达与纯化 | 第60-61页 |
| 3.2.7 二醇脱水酶的表达与纯化 | 第61页 |
| 3.2.8 蛋白浓度的测定 | 第61页 |
| 3.2.9 甘油脱水酶和二醇脱水酶催化长碳链多元醇的活性 | 第61-62页 |
| 3.2.10 脱水酶和乙醇脱氢酶偶联反应 | 第62页 |
| 3.2.11 检测方法 | 第62-63页 |
| 3.3 实验结果 | 第63-74页 |
| 3.3.1 野生型甘油脱水酶和二醇脱水酶的纯化 | 第63-64页 |
| 3.3.2 野生型脱水酶催化六种多元醇的酶活测定 | 第64-65页 |
| 3.3.3 野生型脱水酶催化六种多元醇的产物检测 | 第65-70页 |
| 3.3.4 甘油脱水酶和二醇脱水酶双突变体的纯化 | 第70-71页 |
| 3.3.5 脱水酶双突变体催化六种多元醇的酶活测定 | 第71-72页 |
| 3.3.6 脱水酶双突变体催化六种多元醇的产物检测 | 第72-74页 |
| 3.4 讨论 | 第74-75页 |
| 3.5 本章小结 | 第75-77页 |
| 第4章 脱水酶转化多羟基化合物生成烷醇的代谢途径构建 | 第77-95页 |
| 4.1 引言 | 第77页 |
| 4.2 材料与方法 | 第77-84页 |
| 4.2.1 菌株,质粒和引物 | 第77-79页 |
| 4.2.2 仪器设备 | 第79页 |
| 4.2.3 化学试剂 | 第79页 |
| 4.2.4 分子试剂 | 第79页 |
| 4.2.5 培养基 | 第79页 |
| 4.2.6 甘油脱水酶和二醇脱水酶在赤藓糖醇到1,4-丁二醇途径中的应用 | 第79-80页 |
| 4.2.7 甘油脱水酶和二醇脱水酶在1,2-戊二醇到1-戊醇途径中的应用 | 第80-81页 |
| 4.2.8 甘油脱水酶和二醇脱水酶在木糖到1,4-丁二醇途径中的应用 | 第81-82页 |
| 4.2.9 甘油脱水酶和二醇脱水酶催化1,2,4-丁三醇的动力学参数测定 | 第82-83页 |
| 4.2.10 分析方法 | 第83-84页 |
| 4.3 实验结果 | 第84-92页 |
| 4.3.1 大肠杆菌重组菌催化赤藓糖醇生成1,4-丁二醇的可行性研究 | 第84-85页 |
| 4.3.2 大肠杆菌重组菌催化1,2-戊二醇生成1-戊醇的可行性研究 | 第85-86页 |
| 4.3.3 大肠杆菌重组菌催化木糖合成1,4-丁二醇的可行性研究 | 第86-89页 |
| 4.3.4 甘油脱水酶和二醇脱水酶催化1,2,4-丁三醇的动力学参数测定 | 第89-92页 |
| 4.4 讨论 | 第92-93页 |
| 4.5 本章小结 | 第93-95页 |
| 第5章 甘油脱水酶催化四碳多元醇的进一步研究 | 第95-104页 |
| 5.1 引言 | 第95-96页 |
| 5.2 材料与方法 | 第96-97页 |
| 5.2.1 菌株、质粒和引物 | 第96页 |
| 5.2.2 仪器设备 | 第96页 |
| 5.2.3 化学试剂 | 第96页 |
| 5.2.4 分子试剂 | 第96页 |
| 5.2.5 培养基 | 第96页 |
| 5.2.6 重组菌静息细胞的制备 | 第96页 |
| 5.2.7 静息细胞催化的培养条件 | 第96-97页 |
| 5.2.8 分析方法 | 第97页 |
| 5.2.9 检测甘油脱水酶双突变体催化赤藓糖醇异构体的酶活 | 第97页 |
| 5.2.10 测定甘油脱水酶双突变体催化1,2,4-丁三醇异构体的动力学参数 | 第97页 |
| 5.3 实验结果 | 第97-101页 |
| 5.3.1 静息细胞的浓度对重组菌催化赤藓糖醇的影响 | 第97-98页 |
| 5.3.2 温度对重组菌催化赤藓糖醇的影响 | 第98页 |
| 5.3.3 底物浓度对重组菌催化赤藓糖醇的影响 | 第98-99页 |
| 5.3.4 初始pH对重组菌催化赤藓糖醇的影响 | 第99-100页 |
| 5.3.5 检测甘油脱水酶双突变体催化赤藓糖醇异构体的酶活 | 第100页 |
| 5.3.6 甘油脱水酶双突变体催化1,2,4-丁三醇异构体的动力学参数的测定 | 第100-101页 |
| 5.4 讨论 | 第101-103页 |
| 5.5 本章小结 | 第103-104页 |
| 第6章 总结与展望 | 第104-107页 |
| 参考文献 | 第107-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 攻读博士学位期间发表论文情况 | 第120-121页 |
| 附录 | 第121-123页 |
| 卷内备考表 | 第123页 |
