| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第13-25页 |
| 1.1 蓝细菌概述 | 第13页 |
| 1.2 集胞藻PCC6803 概述 | 第13-14页 |
| 1.3 环境胁迫 | 第14-15页 |
| 1.4 参与胁迫响应的信号接收和传导机制 | 第15-17页 |
| 1.4.1 激酶和调控蛋白组成的二元系统 | 第15-16页 |
| 1.4.2 RNA聚合酶σ因子 | 第16-17页 |
| 1.5 S2P级联 | 第17-18页 |
| 1.5.1 S2P蛋白酶的差异和保守性 | 第17-18页 |
| 1.5.2 S2P级联底物识别 | 第18页 |
| 1.6 集胞藻PCC6803 中的S2P研究现状 | 第18-19页 |
| 1.7 集胞藻适应盐胁迫的可能机理 | 第19-23页 |
| 1.7.1 集胞藻适应盐胁迫的动态过程 | 第19-21页 |
| 1.7.2 盐胁迫感应和信号传导 | 第21-22页 |
| 1.7.3 转录组和蛋白质组研究盐胁迫现状 | 第22-23页 |
| 1.8 本论文立题背景、研究内容和意义 | 第23-25页 |
| 1.8.1 立题背景和意义 | 第23-24页 |
| 1.8.2 研究内容 | 第24-25页 |
| 第二章 S2P成员Sll0528 参与多种胁迫响应 | 第25-53页 |
| 2.1 引言 | 第25-26页 |
| 2.2 材料与方法 | 第26-28页 |
| 2.2.1 主要材料与试剂 | 第26-27页 |
| 2.2.2 主要仪器与设备 | 第27-28页 |
| 2.3 主要培养基和试剂配制 | 第28-29页 |
| 2.4 实验方法 | 第29-35页 |
| 2.4.1 培养条件 | 第29页 |
| 2.4.2 集胞藻PCC 6803 基因组DNA提取 | 第29-30页 |
| 2.4.3 集胞藻PCC6803 总RNA提取 | 第30-31页 |
| 2.4.4 RNA样品中去DNA | 第31-32页 |
| 2.4.5 目的基因获取 | 第32页 |
| 2.4.6 定向插入质粒的构建策略 | 第32-33页 |
| 2.4.7 RT-PCR和实时荧光定量PCR | 第33页 |
| 2.4.8 生长曲线测定 | 第33页 |
| 2.4.9 各种胁迫条件处理 | 第33-34页 |
| 2.4.10 全细胞吸收光谱 | 第34页 |
| 2.4.11 叶绿素含量的测定 | 第34页 |
| 2.4.12 藻蓝蛋白含量的测定 | 第34页 |
| 2.4.13 低温叶绿素荧光值测定 | 第34-35页 |
| 2.4.14 集胞藻细胞粒度测定 | 第35页 |
| 2.5 结果与讨论 | 第35-51页 |
| 2.5.1 Sll0528 完全缺失突变体鉴定 | 第35-37页 |
| 2.5.1.1 PCR鉴定 | 第35-36页 |
| 2.5.1.2 sll0528 缺失突变体RT-PCR鉴定 | 第36-37页 |
| 2.5.2 Sll0528 在多种胁迫条件下的功能分析 | 第37-51页 |
| 2.5.2.1 Sll0528 在盐胁迫适应中扮演重要角色 | 第37-46页 |
| 2.5.2.2 Sll0528 对渗透胁迫适应必不可少 | 第46-47页 |
| 2.5.2.3 Sll0528 对冷胁迫适应非常关键 | 第47-49页 |
| 2.5.2.4 Sll0528 对于酸、高光和葡萄糖混养胁迫并非必不可少 | 第49-51页 |
| 2.6 本章小结 | 第51-53页 |
| 第三章 Sll0528 蛋白活性分析及体外研究Slr0643 与Sll0857 酶切作用 | 第53-74页 |
| 3.1 引言 | 第53-55页 |
| 3.2 材料与方法 | 第55-58页 |
| 3.2.1 主要材料与试剂 | 第55-56页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第56页 |
| 3.2.3 主要试剂的配制 | 第56-58页 |
| 3.3 实验方法 | 第58-65页 |
| 3.3.1 重组质粒pGEX-2T+Slr0643 core domain中HELSH突变为HQLSH和HELDH | 第58-60页 |
| 3.3.1.1 定点突变原理 | 第58页 |
| 3.3.1.2 操作方法 | 第58-60页 |
| 3.3.2 重组质粒融合蛋白的诱导表达 | 第60页 |
| 3.3.3 重组融合蛋白纯化 | 第60-61页 |
| 3.3.3.1 变性法纯化假定底物Sll0857 蛋白（His标签蛋白） | 第60-61页 |
| 3.3.3.2 纯化活性S2P蛋白酶（GST标签蛋白） | 第61页 |
| 3.3.4 假定底物Sll0857 系列质粒构建 | 第61-62页 |
| 3.3.5 双质粒共转化表达体系 | 第62-64页 |
| 3.3.5.1 电转化感受态的制备 | 第62-63页 |
| 3.3.5.2 电击转化 | 第63页 |
| 3.3.5.3 共表达及菌体裂解步骤 | 第63-64页 |
| 3.3.6 Western Blot | 第64-65页 |
| 3.4 Slr0643 与Sll0857 体外酶切结果与分析 | 第65-71页 |
| 3.4.1 Sll0857 融合蛋白示意图 | 第65-66页 |
| 3.4.2 体外重组蛋白纯化与酶切 | 第66-67页 |
| 3.4.3 共表达体系中不同羧基端的Sll0857 蛋白的酶切效果 | 第67-68页 |
| 3.4.4 Sll0857 全长与Slr0643core domain体外共表达纯化效果 | 第68-69页 |
| 3.4.5 考察Slr0643core domain中HExxH保守区域改变前后的酶切效果 | 第69-70页 |
| 3.4.6 考察加cAMP对Slr0643 蛋白酶水解Sll0857 蛋白效果的影响 | 第70-71页 |
| 3.5 Sll0528 蛋白活性分析结果 | 第71-73页 |
| 3.5.1 Sll0528 酶切特性分析 | 第71-72页 |
| 3.5.2 Sll0528 蛋白酶纯化条件 | 第72-73页 |
| 3.6 本章小结 | 第73-74页 |
| 第四章 Sigma因子Sll0856（SigH）参与多种胁迫响应 | 第74-89页 |
| 4.1 引言 | 第74页 |
| 4.2 材料和仪器 | 第74-77页 |
| 4.2.1 主要材料与试剂 | 第74-76页 |
| 4.2.2 主要仪器与设备 | 第76-77页 |
| 4.3 实验方法 | 第77-79页 |
| 4.3.1 定向插入质粒的构建策略 | 第77-78页 |
| 4.3.2 脂肪酸组分分析（GC-MS） | 第78页 |
| 4.3.3 其他实验方法 | 第78-79页 |
| 4.4 实验结果与分析 | 第79-87页 |
| 4.4.1 Sll0856 完全突变体验证和鉴定 | 第79-80页 |
| 4.4.1.1 Sll0856 完全缺失突变体PCR鉴定 | 第79-80页 |
| 4.4.1.2 Sll0856 完全缺失突变体RT-PCR鉴定 | 第80页 |
| 4.4.2 Δsll0856 在多种胁迫下的实验结果与分析 | 第80-87页 |
| 4.4.2.1 Sll0856 并非酸胁迫适应必不可少的sigma因子 | 第80-81页 |
| 4.4.2.2 Sll0856 可能参与盐胁迫适应 | 第81-83页 |
| 4.4.2.3 SigH是冷胁迫适应非常重要的Sigma因子 | 第83-87页 |
| 4.5 本章小结 | 第87-89页 |
| 结论与展望 | 第89-92页 |
| 1. 结论 | 第89-90页 |
| 2. 创新点 | 第90页 |
| 3. 展望 | 第90-92页 |
| 参考文献 | 第92-102页 |
| 攻读硕士期间取得的研究成果 | 第102-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 附件 | 第104页 |
