| 摘要 | 第2-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 引言 | 第8-10页 |
| 实验材料 | 第10-14页 |
| 1 受试细胞 | 第10页 |
| 2 主要仪器和设备 | 第10-11页 |
| 3 主要试剂与材料 | 第11-12页 |
| 4 主要溶液的配制 | 第12-14页 |
| 实验方法 | 第14-23页 |
| 1 细胞培养 | 第14-15页 |
| 1.1 OA软骨细胞的原代培养 | 第14页 |
| 1.2 细胞冻存 | 第14页 |
| 1.3 细胞复苏 | 第14-15页 |
| 2 软骨细胞的鉴定 | 第15页 |
| 2.1 甲苯胺蓝染色 | 第15页 |
| 2.2 免疫细胞化学 | 第15页 |
| 3 Piezo1-siRNA慢病毒载体的构建 | 第15-16页 |
| 4 慢病毒介导的Piezo1-siRNA转染 | 第16-17页 |
| 4.1 慢病毒滴度测定 | 第16页 |
| 4.2 细胞感染预实验 | 第16-17页 |
| 4.3 正式转染si-RNA | 第17页 |
| 5 OA软骨细胞体外机械牵张应力模型的构建 | 第17页 |
| 6 免疫荧光激光共聚焦技术 | 第17-18页 |
| 7 实时荧光定量PCR检测技术 | 第18-20页 |
| 7.1 引物设计合成 | 第18页 |
| 7.2 各组总RNA的提取 | 第18-19页 |
| 7.3 逆转录(RT) | 第19-20页 |
| 7.4 荧光定量PCR | 第20页 |
| 7.5 qRT-PCR结果分析 | 第20页 |
| 8 Westernblot蛋白印迹技术 | 第20-21页 |
| 8.1 细胞总蛋白的提取 | 第20页 |
| 8.2 蛋白浓度检测 | 第20页 |
| 8.3 配胶 | 第20-21页 |
| 8.4 上样及电泳 | 第21页 |
| 8.5 转膜 | 第21页 |
| 8.6 封闭抗体 | 第21页 |
| 8.7 ECL显影 | 第21页 |
| 8.8 WB结果分析 | 第21页 |
| 9 统计学分析 | 第21-23页 |
| 实验结果 | 第23-32页 |
| 1 软骨细胞的鉴定 | 第23-24页 |
| 2 转染后细胞形态 | 第24-25页 |
| 3 细胞生长曲线 | 第25页 |
| 4 转染效率与最佳干扰序列 | 第25-27页 |
| 5 Piezo1和P38表达位置及机械牵张应力下Piezo1的表达变化 | 第27-28页 |
| 6 Piezo1、P38、MMP-13、TIMP1、CollagenII和Aggrecan的mRNA表达水平 | 第28-31页 |
| 7 CollagenII、Aggrecan蛋白的表达水平 | 第31-32页 |
| 讨论 | 第32-36页 |
| 结论 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-40页 |
| 综述 | 第40-52页 |
| 参考文献 | 第48-52页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第52-53页 |
| 缩略词表 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
