| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4页 |
| 缩略语表 | 第9-10页 |
| 1 引言 | 第10-19页 |
| 1.1 绵羊支原体肺炎简介 | 第10页 |
| 1.2 病原学(绵羊肺炎支原体) | 第10-11页 |
| 1.2.1 一般特征 | 第10-11页 |
| 1.2.2 基因组结构 | 第11页 |
| 1.3 流行病学 | 第11页 |
| 1.4 临诊症状 | 第11-12页 |
| 1.4.1 最急性型 | 第12页 |
| 1.4.2 急性型 | 第12页 |
| 1.4.3 慢性型 | 第12页 |
| 1.5 病理变化 | 第12页 |
| 1.6 发病机理 | 第12-13页 |
| 1.7 诊断 | 第13-14页 |
| 1.7.1 病原分离 | 第13-14页 |
| 1.7.2 血清学诊断 | 第14页 |
| 1.7.3 分子生物学诊断 | 第14页 |
| 1.8 绵羊支原体肺炎的预防与治疗 | 第14-15页 |
| 1.9 疫苗的研究进展与现状 | 第15页 |
| 1.10 实时荧光定量PCR | 第15-16页 |
| 1.10.1 实时荧光定量PCR简介 | 第15页 |
| 1.10.2 实时荧光定量PCR类别 | 第15-16页 |
| 1.11 高通量基因测序 | 第16-18页 |
| 1.11.1 第一代测序技术简介 | 第16页 |
| 1.11.2 第二代测序技术简介 | 第16-17页 |
| 1.11.3 第三代测序技术简介 | 第17-18页 |
| 1.12 本研究的目的与意义 | 第18-19页 |
| 2 MO TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立 | 第19-33页 |
| 2.1 试验材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 菌株/毒株 | 第19页 |
| 2.1.2 临床样本 | 第19页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第19页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第19页 |
| 2.1.5 引物和探针 | 第19-20页 |
| 2.2 试验方法 | 第20-25页 |
| 2.2.1 MO基因组DNA的提取 | 第20-21页 |
| 2.2.2 常规PCR方法的建立 | 第21页 |
| 2.2.3 标准阳性质粒模板的建立 | 第21-23页 |
| 2.2.4 实时荧光定量PCR反应体系及条件的优化 | 第23-24页 |
| 2.2.5 实时荧光定量PCR标准曲线的建立 | 第24页 |
| 2.2.6 实时荧光定量PCR的敏感性试验 | 第24页 |
| 2.2.7 实时荧光定量PCR的特异性试验 | 第24页 |
| 2.2.8 实时荧光定量PCR的重复性试验 | 第24页 |
| 2.2.9 实时荧光定量PCR方法的临床样品检测 | 第24-25页 |
| 2.3 结果 | 第25-31页 |
| 2.3.1 常规PCR扩增结果 | 第25页 |
| 2.3.2 重组质粒PCR鉴定结果 | 第25页 |
| 2.3.3 目的片段测序结果 | 第25-26页 |
| 2.3.4 质粒拷贝数计算结果 | 第26页 |
| 2.3.5 实时荧光定量PCR反应体系参数优化结果 | 第26-28页 |
| 2.3.6 实时荧光定量PCR标准曲线绘制结果 | 第28页 |
| 2.3.7 实时荧光定量PCR敏感性试验结果 | 第28-29页 |
| 2.3.8 实时荧光定量PCR特异性试验结果 | 第29-30页 |
| 2.3.9 实时荧光定量PCR重复性试验结果 | 第30-31页 |
| 2.3.10 临床样品检测结果 | 第31页 |
| 2.4 讨论 | 第31-33页 |
| 3 MO全基因组序列测定及分析 | 第33-46页 |
| 3.1 试验材料 | 第33页 |
| 3.1.1 菌株 | 第33页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第33页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第33页 |
| 3.2 试验方法 | 第33-34页 |
| 3.2.1 MO基因组DNA的提取 | 第33页 |
| 3.2.2 MO全基因组的测定与分析 | 第33-34页 |
| 3.3 结果 | 第34-43页 |
| 3.3.1 测序数据质控结果 | 第34页 |
| 3.3.2 测序数据统计结果 | 第34-35页 |
| 3.3.3 基因组组装结果 | 第35页 |
| 3.3.4 重复序列预测结果 | 第35页 |
| 3.3.5 rRNA/tRNA查找结果 | 第35-36页 |
| 3.3.6 基因预测结果 | 第36-37页 |
| 3.3.7 基因功能注释结果 | 第37-42页 |
| 3.3.8 16SrRNA进化树的构建及同源性比对结果 | 第42-43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-46页 |
| 4 结论 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 作者简介 | 第53页 |
