| 摘要 | 第7-8页 |
| ABSTRACT | 第8-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-21页 |
| 1.1 基因组编辑的常用方法 | 第12-18页 |
| 1.1.1 锌指核酸酶(zinc-finger nuclease,ZFN) | 第12-13页 |
| 1.1.2 转录激活样效应物核酸酶 | 第13-15页 |
| 1.1.2.1 TAL效应因子的结构 | 第13-14页 |
| 1.1.2.2 TALE与核苷酸特异性结合的机制及应用 | 第14页 |
| 1.1.2.3 人工TALEN的模块组装方法 | 第14-15页 |
| 1.1.2.4 TALEN在植物中的应用及存在问题 | 第15页 |
| 1.1.3 CRISPR介导的Cas9核酸酶 | 第15-18页 |
| 1.1.3.1 CRISPR/Cas系统的机制 | 第15-16页 |
| 1.1.3.2 人工CRISPR/Cas系统的构建 | 第16-17页 |
| 1.1.3.3 gRNA：Cas9的应用 | 第17页 |
| 1.1.3.4 CRISPR在植物中的应用及存在问题 | 第17-18页 |
| 1.2 目的基因的研究背景 | 第18-21页 |
| 1.2.1 基因IAA2的研究背景 | 第18-19页 |
| 1.2.2 基因SIRT2的研究背景 | 第19页 |
| 1.2.3 基因SAUR的研究背景 | 第19-21页 |
| 第二章 材料和方法 | 第21-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第21页 |
| 2.2 原始载体 | 第21页 |
| 2.3 入门载体的构建 | 第21-24页 |
| 2.3.1 Talen靶位点设计 | 第21页 |
| 2.3.2 双酶切处理talent载体和pEntry-M | 第21-22页 |
| 2.3.3 酶切产物回收 | 第22-23页 |
| 2.3.4 连接反应 | 第23-24页 |
| 2.3.5 转化及阳性克隆鉴定 | 第24页 |
| 2.4 表达载体的构建 | 第24页 |
| 2.5 转基因、筛选及种子萌发 | 第24-26页 |
| 2.5.1 拟南芥的培养 | 第24-25页 |
| 2.5.2 电转化 | 第25页 |
| 2.5.3 转基因 | 第25-26页 |
| 2.5.4 筛选 | 第26页 |
| 2.5.5 种子萌发 | 第26页 |
| 2.6 数据收集 | 第26-29页 |
| 2.6.1 DNA水平的数据收集 | 第26-28页 |
| 2.6.1.1 植物基因组DNA的提取(CTAB法) | 第26-27页 |
| 2.6.1.2 目的基因的扩增 | 第27页 |
| 2.6.1.3 突变体的检测 | 第27-28页 |
| 2.6.2 RNA水平的数据收集 | 第28-29页 |
| 2.6.2.1 植物总RNA提取 | 第28-29页 |
| 2.6.2.2 逆转录 | 第29页 |
| 2.6.2.3 RT-PCR | 第29页 |
| 2.6.2.4 突变体的检测 | 第29页 |
| 2.7 愈伤组织的诱导及再生 | 第29-32页 |
| 2.7.1 基本培养基成分 | 第29-31页 |
| 2.7.2 愈伤组织培养基成分 | 第31页 |
| 2.7.3 愈伤组织培养流程 | 第31-32页 |
| 第三章 结果和分析 | 第32-46页 |
| 3.1 Talen相关靶位点设计和载体构建 | 第32-36页 |
| 3.1.1 IAA2-Talen相关信息 | 第32-33页 |
| 3.1.2 SIRT2-Talen相关信息 | 第33-34页 |
| 3.1.3 SAUR-Talen相关信息 | 第34-36页 |
| 3.2 CRISPR/Cas9系统的构建 | 第36-37页 |
| 3.3 转基因株系阳性苗的筛选 | 第37-38页 |
| 3.4 Talen在愈伤组织中作用效果 | 第38-41页 |
| 3.5 Talen在植株中的作用效果 | 第41-44页 |
| 3.6 CRISPR的作用效果 | 第44-46页 |
| 第四章 讨论 | 第46-50页 |
| 4.1 Talen和CRISPR体系的比较 | 第46-47页 |
| 4.2 Talen在愈伤组织和叶片细胞中的作用比较 | 第47-49页 |
| 4.3 体细胞突变与种系突变 | 第49页 |
| 4.4 实验展望 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
