| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-23页 |
| 1.1 羊奶的营养价值及其脂肪酸组成 | 第14-15页 |
| 1.2 超长链脂肪酸延伸酶 | 第15-17页 |
| 1.2.1 ELOVLs 的结构 | 第15-16页 |
| 1.2.2 脂肪酸的延伸反应 | 第16-17页 |
| 1.2.3 ELOVLs 在乳腺脂肪酸代谢中的作用 | 第17页 |
| 1.3 ELOVL6 基因 | 第17-21页 |
| 1.3.1 ELOVL6 在脂肪酸代谢中的作用 | 第18页 |
| 1.3.2 ELOVL6 基因在疾病中的研究 | 第18-20页 |
| 1.3.3 ELOVL6 基因的表达调控 | 第20-21页 |
| 1.4 ELOVL 家族中其他 ELOVL 的功能与表达调控 | 第21-22页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第22-23页 |
| 第二章 奶山羊 ELOVL6 基因的克隆及组织表达 | 第23-32页 |
| 引言 | 第23页 |
| 2.1 材料与方法 | 第23-27页 |
| 2.1.1 样品的采集 | 第23页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第23页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第23-24页 |
| 2.1.4 组织总 RNA 的提取及 cDNA 的合成 | 第24页 |
| 2.1.5 引物的设计 | 第24-25页 |
| 2.1.6 ELOVL6 基因 CDS 区的 PCR 扩增 | 第25-26页 |
| 2.1.7 PCR 产物的回收 | 第26页 |
| 2.1.8 目的基因的连接与转化 | 第26页 |
| 2.1.9 质粒的提取及酶切鉴定 | 第26-27页 |
| 2.1.10 序列分析及注册 | 第27页 |
| 2.1.11 组织表达分析 | 第27页 |
| 2.2 结果与分析 | 第27-30页 |
| 2.2.1 奶山羊 ELOVL6 基因 CDS 区的克隆 | 第27-28页 |
| 2.2.2 奶山羊 ELOVL6 基因 CDS 区同源性分析 | 第28页 |
| 2.2.3 奶山羊 ELOVL6 基因的蛋白结构预测 | 第28-29页 |
| 2.2.4 组织表达分析 | 第29-30页 |
| 2.3 讨论 | 第30-31页 |
| 2.3.1 奶山羊 ELOVL6 基因的克隆及序列分析 | 第30-31页 |
| 2.3.2 奶山羊 ELOVL6 基因的组织表达分析 | 第31页 |
| 2.4 小结 | 第31-32页 |
| 第三章 奶山羊 ELOVL6 基因的超表达研究 | 第32-44页 |
| 引言 | 第32页 |
| 3.1 材料与方法 | 第32-37页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第32页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第32-33页 |
| 3.1.3 pAdTrack-CMV-HA-ELOVL6 的构建与鉴定 | 第33页 |
| 3.1.4 重组腺病毒载体 pAdEasy-HA-ELOVL6 的构建与鉴定 | 第33-34页 |
| 3.1.5 pAdEasy-HA-ELOVL6 质粒的纯化 | 第34页 |
| 3.1.6 重组腺病毒的包装、扩增与滴度的测定 | 第34页 |
| 3.1.7 重组腺病毒感染奶山羊乳腺上皮细胞最佳 MOI(multiplicity of infection)值的确定 | 第34-35页 |
| 3.1.8 ELOVL6 基因超表达效果的检测 | 第35页 |
| 3.1.9 超表达 ELOVL6 基因的乳腺上皮细胞中脂肪酸的测定 | 第35页 |
| 3.1.10 超表达 ELOVL6 基因的乳腺上皮细胞中甘油三酯（TG）的测定 | 第35-36页 |
| 3.1.11 超表达 ELOVL6 基因的乳腺上皮细胞中中脂滴的测定 | 第36页 |
| 3.1.12 细胞中脂代谢相关基因的检测 | 第36-37页 |
| 3.2 结果与分析 | 第37-41页 |
| 3.2.1 重组腺病毒载体 pAdEasy-HA-ELOVL6 的构建 | 第37页 |
| 3.2.2 重组腺病毒的包装、扩增与滴度测定 | 第37-38页 |
| 3.2.3 重组腺病毒感染乳腺上皮细胞最佳 MOI 值的确定 | 第38页 |
| 3.2.4 ELOVL6 基因超表达效果的检测 | 第38-39页 |
| 3.2.5 ELOVL6 基因超表达对细胞中脂肪酸组成的影响 | 第39-40页 |
| 3.2.6 ELOVL6 基因超表达对细胞中甘油三酯含量的影响 | 第40页 |
| 3.2.7 ELOVL6 基因超表达对细胞中脂滴积累的影响 | 第40-41页 |
| 3.3 讨论 | 第41-43页 |
| 3.3.1 重组腺病毒的包装 | 第41-42页 |
| 3.3.2 ELOVL6 基因超表达对细胞中脂肪酸组成的影响 | 第42页 |
| 3.3.3 ELOVL6 基因超表达对细胞中 TG 含量的影响 | 第42-43页 |
| 3.3.4 ELOVL6 基因超表达对细胞内脂滴积累的影响 | 第43页 |
| 3.4 小结 | 第43-44页 |
| 第四章 奶山羊 ELOVL6 基因的干扰研究 | 第44-57页 |
| 引言 | 第44页 |
| 4.1 材料与方法 | 第44-48页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第44页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第44页 |
| 4.1.3 奶山羊 ELOVL6 基因 shRNA 的设计与合成 | 第44-45页 |
| 4.1.4 pENTR/CMV-GFP/U6-shRNA 载体的构建与鉴定 | 第45-46页 |
| 4.1.5 重组腺病毒载体 pAD/PL-DEST/CMV-GFP/U6-shRNA 的构建及鉴定 | 第46-47页 |
| 4.1.6 重组腺病毒的包装、扩增与滴度测定 | 第47页 |
| 4.1.7 重组腺病毒感染奶山羊乳腺上皮细胞最佳 MOI 值的确定 | 第47页 |
| 4.1.8 ELOVL6 基因干扰效果的检测 | 第47-48页 |
| 4.1.9 干扰 ELOVL6 基因的乳腺上皮细胞中脂肪酸的测定 | 第48页 |
| 4.1.10 干扰 ELOVL6 基因的乳腺上皮细胞中 TG 的测定 | 第48页 |
| 4.1.11 干扰 ELOVL6 基因的乳腺上皮细胞中脂滴的测定 | 第48页 |
| 4.1.12 细胞中脂代谢相关基因的检测 | 第48页 |
| 4.2 结果与分析 | 第48-54页 |
| 4.2.1 pENTR/CMV-GFP/U6-shRNA 穿梭载体的构建 | 第48-49页 |
| 4.2.2 重组腺病毒载体 pAD/PL-DEST/CMV-GFP/U6-shRNA 的构建及鉴定 | 第49页 |
| 4.2.3 重组腺病毒的包装、扩增与滴度测定 | 第49-50页 |
| 4.2.4 重组腺病毒感染乳腺上皮细胞最佳 MOI 值的确定 | 第50-51页 |
| 4.2.5 ELOVL6 基因干扰效率的检测 | 第51页 |
| 4.2.6 ELOVL6 基因干扰后对细胞中脂肪酸组成的影响 | 第51-52页 |
| 4.2.7 ELOVL6 基因干扰对细胞中 TG 含量的影响 | 第52-53页 |
| 4.2.8 ELOVL6 基因干扰对细胞中脂滴积累的影响 | 第53-54页 |
| 4.3 讨论 | 第54-56页 |
| 4.3.1 shRNA 的设计 | 第54-55页 |
| 4.3.2 ELOVL6 基因干扰对细胞中脂肪酸组成的影响 | 第55-56页 |
| 4.3.3 ELOVL6 基因干扰后对细胞中 TG 含量和脂滴积累的影响 | 第56页 |
| 4.4 小结 | 第56-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 附录 | 第64-68页 |
| 附录 1 奶山羊 ELOVL6 基因的核酸序列比对结果及氨基酸序列比对结果 | 第64-66页 |
| 附录 2 实验方法的具体操作步骤 | 第66-68页 |
| 缩略词 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 作者简介及硕士期间发表论文 | 第70页 |
