| 摘要 | 第1-15页 |
| Abstract | 第15-18页 |
| 引言 | 第18-36页 |
| 1 相关研究概况 | 第18-34页 |
| ·DNJ 的研究概况 | 第18-22页 |
| ·DNJ 的性质及来源 | 第18-19页 |
| ·DNJ 的获得途径 | 第19页 |
| ·DNJ 的药理作用 | 第19-21页 |
| ·DNJ 的降血糖作用 | 第19-20页 |
| ·DNJ 的抗病毒作用 | 第20页 |
| ·DNJ 对肿瘤转移的抑制作用 | 第20-21页 |
| ·DNJ 的检测方法 | 第21页 |
| ·DNJ 的应用前景 | 第21-22页 |
| ·食品工业 | 第21-22页 |
| ·制药工业 | 第22页 |
| ·植物内生菌的研究概况 | 第22-32页 |
| ·植物内生菌的定义 | 第22页 |
| ·内生菌的来源、分布及其生物多样性 | 第22-24页 |
| ·内生菌的分离鉴定 | 第24-26页 |
| ·内生菌的分离方法 | 第24页 |
| ·内生菌分离消毒彻底性的检测方法 | 第24页 |
| ·内生菌分离鉴定中采用的分子生物学技术 | 第24-26页 |
| ·内生菌的生物学作用 | 第26-29页 |
| ·促生作用 | 第26页 |
| ·内生固氮作用 | 第26-27页 |
| ·内生菌的生防作用 | 第27-28页 |
| ·外源基因载体 | 第28-29页 |
| ·内生菌所产活性物质的多样性 | 第29-31页 |
| ·抗肿瘤物质类 | 第29-30页 |
| ·抗菌活性物质类 | 第30-31页 |
| ·抗病毒物质类 | 第31页 |
| ·抗糖尿病物质类 | 第31页 |
| ·其他活性物质类 | 第31页 |
| ·内生菌的开发前景展望 | 第31-32页 |
| ·微生物发酵优化的研究概况 | 第32-34页 |
| ·发酵概况 | 第32-33页 |
| ·数理统计方法在微生物发酵工艺优化中的应用 | 第33-34页 |
| 2 本研究的目的和意义 | 第34-36页 |
| 第一章 桑树中产DNJ 内生菌的分离与鉴定 | 第36-67页 |
| 1 材料与方法 | 第36-48页 |
| ·试验材料 | 第36-37页 |
| ·供试植株 | 第36页 |
| ·培养基及缓冲液 | 第36页 |
| ·主要仪器 | 第36页 |
| ·主要试剂 | 第36-37页 |
| ·试验方法 | 第37-38页 |
| ·桑树中产DNJ 内生菌的分离 | 第37页 |
| ·内生菌中DNJ 的测定 | 第37-38页 |
| ·内生菌中DNJ 的提取 | 第37页 |
| ·DNJ 标准液的配制 | 第37页 |
| ·DNJ 的衍生化处理 | 第37-38页 |
| ·DNJ 的测定方法 | 第38页 |
| ·产DNJ 内生细菌的Rep-PCR 基因指纹分析 | 第38页 |
| ·菌株鉴定 | 第38-43页 |
| ·菌体形态观察 | 第38-39页 |
| ·生理生化指标测定 | 第39-43页 |
| ·生长温度测定 | 第39页 |
| ·耐盐试验 | 第39页 |
| ·最适pH 值测定 | 第39页 |
| ·好氧性和厌氧性测定(O/F 测定) | 第39-40页 |
| ·运动性测定 | 第40页 |
| ·接触酶试验 | 第40页 |
| ·淀粉水解试验 | 第40页 |
| ·明胶液化试验 | 第40页 |
| ·反硝化试验 | 第40-41页 |
| ·柠檬酸盐利用试验 | 第41页 |
| ·硝酸盐还原试验 | 第41页 |
| ·亚硝酸盐还原试验 | 第41页 |
| ·苯丙氨酸脱氨酶产生试验 | 第41-42页 |
| ·酯酶（吐温80）试验 | 第42页 |
| ·H_2S 产生试验 | 第42页 |
| ·吲哚产生试验 | 第42页 |
| ·脓青素产生试验 | 第42页 |
| ·甲基红（MR）试验 | 第42-43页 |
| ·V-P 试验 | 第43页 |
| ·纤维素分解试验 | 第43页 |
| ·Biolog 自动细菌鉴定仪鉴定 | 第43-44页 |
| ·脂肪酸分析 | 第44页 |
| ·16S rDNA 序列分析及其系统进化树的构建 | 第44-47页 |
| ·基因组DNA 的提取 | 第44-45页 |
| ·16S rDNA 片段的PCR 扩增 | 第45页 |
| ·DNA 纯化 | 第45页 |
| ·质粒载体与目的DNA 连接 | 第45页 |
| ·感受态细胞制备 | 第45-46页 |
| ·转化 | 第46页 |
| ·重组质粒鉴定 | 第46页 |
| ·测序 | 第46-47页 |
| ·16S rDNA 序列分析 | 第47页 |
| ·Y1 菌株的生物学特性测定 | 第47-48页 |
| ·培养时间对Y1 菌株生长的影响 | 第47页 |
| ·温度对Y1 菌株生长的影响 | 第47页 |
| ·pH 对Y1 菌株生长的影响 | 第47页 |
| ·Y1 菌株对碳源的利用 | 第47-48页 |
| ·Y1 菌株对氮源的利用 | 第48页 |
| 2 结果与分析 | 第48-65页 |
| ·不同组织部位内生菌的数量测定结果 | 第48页 |
| ·内生菌中DNJ 的测定 | 第48-49页 |
| ·产DNJ 内生菌的Rep-PCR 分析 | 第49-51页 |
| ·Y1 菌株的鉴定 | 第51-57页 |
| ·Y1 菌株的形态观察 | 第51-52页 |
| ·Y1 菌株的生理生化特征 | 第52-53页 |
| ·Biolog 自动细菌鉴定仪鉴定结果 | 第53页 |
| ·Y1 菌株的脂肪酸分析结果 | 第53-55页 |
| ·Y1 菌株的16S rDNA 基因序列测定 | 第55-56页 |
| ·Y1 菌株系统进化树的构建 | 第56-57页 |
| ·Y1 菌株的生物学特性测定结果 | 第57-60页 |
| ·培养时间对Y1 菌株生长的影响结果 | 第57-58页 |
| ·温度对Y1 菌株生长的影响结果 | 第58页 |
| ·pH 对Y1 菌株生长的影响结果 | 第58-59页 |
| ·Y1 菌株对碳源的利用结果 | 第59-60页 |
| ·Y1 菌株对氮源的利用结果 | 第60页 |
| ·Y2 菌株鉴定结果 | 第60-65页 |
| ·Y2 菌株形态观察 | 第60-61页 |
| ·Y2 菌株Biolog 自动细菌鉴定仪鉴定结果 | 第61-62页 |
| ·Y2 菌株的脂肪酸分析结果 | 第62-63页 |
| ·Y2 菌株16S rDNA 基因序列测定结果 | 第63-64页 |
| ·Y2 菌株系统进化树的构建 | 第64-65页 |
| 3 小结与讨论 | 第65-67页 |
| 第二章 Y1 菌株产DNJ 的发酵条件与发酵培养基优化 | 第67-87页 |
| 1 材料与方法 | 第67-73页 |
| ·试验材料 | 第67-68页 |
| ·供试菌株 | 第67页 |
| ·培养基 | 第67页 |
| ·试验仪器 | 第67-68页 |
| ·试验方法 | 第68-73页 |
| ·菌株的活化 | 第68页 |
| ·液体种子的制备 | 第68页 |
| ·DNJ 的测定 | 第68-69页 |
| ·发酵液中DNJ 的提取 | 第68页 |
| ·DNJ 标准液的配制 | 第68页 |
| ·DNJ 的衍生化处理 | 第68-69页 |
| ·DNJ 的测定方法 | 第69页 |
| ·产DNJ 发酵条件的优化 | 第69-70页 |
| ·不同接种量对Y1 菌株产DNJ 的影响 | 第69页 |
| ·不同发酵温度对Y1 菌株产DNJ 的影响 | 第69页 |
| ·不同装液量对Y1 菌株产DNJ 的影响 | 第69页 |
| ·不同发酵培养基初始pH 对Y1 菌株产DNJ 的影响 | 第69-70页 |
| ·Y1 菌株发酵培养基的优化 | 第70-73页 |
| ·不同碳源对Y1 菌株产DNJ 的影响 | 第70页 |
| ·不同有机氮源对Y1 菌株产DNJ 的影响 | 第70页 |
| ·不同无机氮源对Y1 菌株产DNJ 的影响 | 第70页 |
| ·不同C/N 比对Y1 菌株产DNJ 的影响 | 第70-71页 |
| ·不同无机盐对Y1 菌株产DNJ 的影响 | 第71页 |
| ·无机盐的营养限制对Y1 菌株产DNJ 的影响 | 第71-72页 |
| ·Plackett-Burman 试验设计 | 第72页 |
| ·最陡爬坡试验 | 第72页 |
| ·中心组合试验 | 第72-73页 |
| 2 结果与分析 | 第73-86页 |
| ·Y1 菌株产DNJ 发酵条件的优化结果 | 第73-75页 |
| ·不同接种量对Y1 菌株产DNJ 的影响结果 | 第73页 |
| ·不同温度对Y1 菌株产DNJ 的影响结果 | 第73-74页 |
| ·不同装液量对Y1 菌株产DNJ 的影响结果 | 第74-75页 |
| ·不同发酵培养基初始pH 对Y1 菌株产DNJ 的影响结果 | 第75页 |
| ·Y1 菌株产DNJ 发酵培养基的优化 | 第75-86页 |
| ·不同碳源对Y1 菌株产DNJ 的影响结果 | 第76-77页 |
| ·不同有机氮源对Y1 菌株产DNJ 的影响结果 | 第77页 |
| ·不同无机氮源对Y1 菌株产DNJ 的影响结果 | 第77-78页 |
| ·不同C/N 比对Y1 菌株产DNJ 的影响结果 | 第78页 |
| ·不同无机盐对Y1 菌株产DNJ 的影响结果 | 第78-79页 |
| ·无机盐的营养限制对Y1 菌株产DNJ 的影响结果 | 第79-80页 |
| ·PB 试验结果 | 第80-81页 |
| ·最陡爬坡试验结果 | 第81-82页 |
| ·中心组合试验结果 | 第82-86页 |
| 3 小结 | 第86-87页 |
| 第三章 Y1 菌株发酵所产DNJ 的初步分离鉴定 | 第87-95页 |
| 1 材料与方法 | 第87-90页 |
| ·试验材料 | 第87-88页 |
| ·供试菌株 | 第87页 |
| ·培养基 | 第87页 |
| ·培养条件 | 第87页 |
| ·主要仪器 | 第87-88页 |
| ·主要试剂 | 第88页 |
| ·主要试验材料 | 第88页 |
| ·试验方法 | 第88-90页 |
| ·Y1 菌株发酵液中DNJ 粗提物的初步纯化 | 第88-89页 |
| ·Y1 菌株发酵液的预处理 | 第88页 |
| ·DNJ 粗提物的离子交换树脂处理 | 第88-89页 |
| ·DNJ 粗提物的HPLC 分析 | 第89-90页 |
| ·DNJ 粗提物及桑叶提取物的制备方法 | 第89页 |
| ·DNJ 标准液的配制 | 第89页 |
| ·DNJ 的衍生化处理 | 第89页 |
| ·DNJ 的测定方法 | 第89-90页 |
| ·DNJ 粗提物的质谱分析 | 第90页 |
| ·DNJ 粗提物及桑叶提取物的制备方法 | 第90页 |
| ·DNJ 标准品提取物的制备方法 | 第90页 |
| ·质谱条件 | 第90页 |
| 2 结果与分析 | 第90-94页 |
| ·Y1 菌株发酵产DNJ 的初步分离纯化 | 第90页 |
| ·DNJ 粗提物及对照品的HPLC 分析 | 第90-92页 |
| ·DNJ 粗提物及对照品的质谱测定结果 | 第92-94页 |
| 3 小结与讨论 | 第94-95页 |
| 第四章 Y1 菌株发酵液对小鼠血糖及若干生理指标的影响 | 第95-105页 |
| 1 材料与方法 | 第95-98页 |
| ·试验材料 | 第95页 |
| ·试验方法 | 第95-97页 |
| ·Y1 菌株发酵液对小鼠的毒性和安全性试验 | 第95-96页 |
| ·Y1 菌株发酵液对小鼠的亚慢性毒性试验方法 | 第95-96页 |
| ·Y1 菌株发酵液对小鼠的急性毒性试验方法 | 第96页 |
| ·糖尿病小鼠的诱导 | 第96页 |
| ·试验分组 | 第96页 |
| ·动物饲料制备 | 第96-97页 |
| ·血糖测定方法 | 第97页 |
| ·Y1 菌株发酵液对小鼠外观状态及脏器的影响 | 第97页 |
| ·试验仪器与试剂 | 第97页 |
| ·主要仪器 | 第97页 |
| ·主要试剂 | 第97页 |
| ·数据处理 | 第97-98页 |
| 2 结果与分析 | 第98-103页 |
| ·Y1 菌株发酵液对小鼠的毒性和安全性试验结果 | 第98页 |
| ·Y1 菌株发酵液对小鼠的亚慢性毒性试验结果 | 第98页 |
| ·Y1 菌株发酵液对小鼠的急性毒性试验结果 | 第98页 |
| ·Y1 菌株发酵液对小鼠血糖的影响结果 | 第98-99页 |
| ·Y1 菌株发酵液对小鼠体重的影响结果 | 第99-100页 |
| ·Y1 菌株发酵液对小鼠进食量的影响结果 | 第100-101页 |
| ·Y1 菌株发酵液对小鼠饮水量的影响结果 | 第101-102页 |
| ·Y1 菌株发酵液对小鼠外观状况的影响结果 | 第102-103页 |
| 3 小结与讨论 | 第103-105页 |
| 讨论与结论 | 第105-108页 |
| 参考文献 | 第108-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
| 攻读硕士研究生期间公开发表的论文 | 第122-123页 |
| 附录 SAS 分析的源程 | 第123-126页 |
