| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 目录 | 第9-11页 |
| 主要英文縮写对照 | 第11-12页 |
| 一、综述 | 第12-22页 |
| 1.1 RV分子结构和复制过程 | 第12-13页 |
| 1.2 狂犬病的病理过程 | 第13-15页 |
| 1.3 N蛋白研究进展 | 第15-17页 |
| 1.4 G蛋白研究进展 | 第17-19页 |
| 1.5 RV感染与宿主免疫反应 | 第19-20页 |
| 1.6 本研究的目的和意义 | 第20-22页 |
| 二、材料与方法 | 第22-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-25页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第22页 |
| 2.1.2 毒株、克隆及表达载体、菌种、细胞 | 第22页 |
| 2.1.3 引物及合成多肽序列 | 第22-23页 |
| 2.1.4 试剂及配制 | 第23-25页 |
| 2.1.5 仪器设备 | 第25页 |
| 2.2 技术路线 | 第25-27页 |
| 2.2.1 N蛋白多克隆抗体制备技术路线与质粒构建 | 第25-27页 |
| 2.2.2 G蛋白多克隆抗体制备技术路线 | 第27页 |
| 2.3 制备N蛋白多克隆抗体的实验方法 | 第27-34页 |
| 2.3.1 PCR扩增目的基因 | 第27-28页 |
| 2.3.2 N基因片段的连接 | 第28页 |
| 2.3.3 TOP10感受态细胞的制备 | 第28-29页 |
| 2.3.4 连接产物的转化 | 第29页 |
| 2.3.5 质粒抽提及双酶切鉴定 | 第29-30页 |
| 2.3.6 pET-N1-4原核表达质粒的构建 | 第30页 |
| 2.3.7 重组菌的诱导表达及鉴定 | 第30-32页 |
| 2.3.8 重组蛋白表达形式鉴定 | 第32页 |
| 2.3.9 包涵体蛋白的纯化与复性 | 第32-33页 |
| 2.3.10 重组N蛋白免疫小鼠制备抗体 | 第33页 |
| 2.3.11 N蛋白多克隆抗体特异性及效价检测 | 第33-34页 |
| 2.4 制备G蛋白多克隆抗体的实验方法 | 第34-36页 |
| 2.4.1 G15-13多肽片段的选择以及合成 | 第34-35页 |
| 2.4.2 G15-13多肽免疫小鼠制备抗体 | 第35页 |
| 2.4.3 G蛋白多克隆抗体特异性 | 第35-36页 |
| 三、实验结果 | 第36-50页 |
| 3.1 N蛋白原核表达载体的构建及多克隆抗体的制备 | 第36-46页 |
| 3.1.1 N1-4目的基因片段的克隆 | 第36-37页 |
| 3.1.2 原核表达载体pET-N1-4的构建 | 第37页 |
| 3.1.3 pET-N1-4转化Rosetta重组菌的表达情况 | 第37-39页 |
| 3.1.4 重组N蛋白的纯化及鉴定 | 第39-41页 |
| 3.1.5 Western blot检测N蛋白多克隆抗体特异性和效价 | 第41-44页 |
| 3.1.6 IFA检测多克隆抗体与RV N蛋白的反应性 | 第44-46页 |
| 3.2 G蛋白多克隆抗体的制备 | 第46-50页 |
| 3.2.1 G15-13多肽合成及免疫小鼠制备抗体 | 第46页 |
| 3.2.2 Western blot检测多克隆抗体RV G蛋白的反应性 | 第46-47页 |
| 3.2.3 IFA检测多克隆抗体与RV G蛋白的反应性 | 第47-50页 |
| 四、讨论 | 第50-54页 |
| 4.1 原核表达载体选择 | 第50页 |
| 4.2 N基因原核表达片段的选择 | 第50页 |
| 4.3 重组N蛋白包涵体的纯化与复性 | 第50-51页 |
| 4.4 N抗体的特异性及效价问题 | 第51-52页 |
| 4.5 N抗体的重要性及应用前景 | 第52页 |
| 4.6 G蛋白多克隆抗体的制备 | 第52-53页 |
| 4.7 G多克隆抗体的特异性及效价鉴定 | 第53页 |
| 4.8 G抗体的重要性及应用前景 | 第53-54页 |
| 五、小结 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 致谢 | 第60页 |
