| 摘要 | 第4-7页 |
| Abstract | 第7-11页 |
| 英文缩略语 | 第12-18页 |
| 第一部分 ：BPD新生鼠肺组织自噬功能的研究 | 第18-39页 |
| 1 前言 | 第18-19页 |
| 2 材料和方法 | 第19-24页 |
| 2.1 主要试剂和仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第20页 |
| 2.2 研究对象和分组 | 第20-21页 |
| 2.2.1 实验对象 | 第20-21页 |
| 2.2.2 BPD模型的建立与分组 | 第21页 |
| 2.3 实验方法 | 第21-24页 |
| 2.3.1 肺组织的采集和处理 | 第21页 |
| 2.3.2 HE染色观察肺组织的形态学改变 | 第21页 |
| 2.3.3 透射电镜下观察凋亡及自噬现象 | 第21页 |
| 2.3.4 TUNEL检测凋亡细胞 | 第21页 |
| 2.3.5 免疫组织化学染色观察LC3B、p62、Lamp1的蛋白表达及其定位 | 第21-22页 |
| 2.3.6 免疫荧光双染观察p180与LC3共定位 | 第22页 |
| 2.3.7 western-blot检测肺组织LC3B-Ⅱ、p62、Lamp1、caspase-3-cleaved的蛋白表达 | 第22-23页 |
| 2.3.8 Realtime-PCR检测肺组织LC3B、p62、Lamp1的mRNA表达 | 第23-24页 |
| 2.4 统计学分析 | 第24页 |
| 3 结果 | 第24-35页 |
| 3.1 肺形态学的改变 | 第24-25页 |
| 3.2 透射电镜下观察细胞超微结构 | 第25-26页 |
| 3.3 自噬及其相关指标检测 | 第26-35页 |
| 3.3.1 透射电镜观察自噬小体 | 第26-28页 |
| 3.3.2 免疫组化观察LC3B、p62、Lamp1蛋白表达及定位 | 第28-30页 |
| 3.3.3 免疫荧光观察LC3B、p62、Lamp1蛋白表达及定位 | 第30-32页 |
| 3.3.4 免疫荧光双染观察LC3B与p180共定位 | 第32页 |
| 3.3.5 Western-blot检测LC3B、P62、lamp1蛋白表达水平 | 第32-33页 |
| 3.3.6 Realtime-PCR检测LC3B、P62、lamp1mRNA表达水平 | 第33-34页 |
| 3.3.7 LC3B-II、P62蛋白表达水平与RAC值相关性分析 | 第34-35页 |
| 4 讨论 | 第35-38页 |
| 5 结论 | 第38-39页 |
| 第二部分 ：BPD新生鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞自噬功能的研究 | 第39-49页 |
| 1 前言 | 第39页 |
| 2 材料和方法 | 第39-43页 |
| 2.1 主要试剂和仪器 | 第39-41页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第39-40页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第40-41页 |
| 2.2 研究对象和分组 | 第41页 |
| 2.2.1 实验对象 | 第41页 |
| 2.2.2 BPD模型的建立与分组 | 第41页 |
| 2.3 实验方法 | 第41-42页 |
| 2.3.1 原代AT-Ⅱ细胞的分离、纯化、培养 | 第41-42页 |
| 2.3.2 透射电镜下鉴定原代AT-Ⅱ细胞 | 第42页 |
| 2.3.3 免疫荧光染色鉴定原代AT-Ⅱ细胞 | 第42页 |
| 2.3.4 western-blot检测肺组织LC3B-Ⅱ、p62、Lamp1、caspase-3-cleaved的蛋白表达 | 第42页 |
| 2.3.5 Realtime-PCR检测肺组织LC3B、p62、Lamp1的mRNA表达 | 第42页 |
| 2.4 统计学分析 | 第42-43页 |
| 3 结果 | 第43-46页 |
| 3.1 原代AT-Ⅱ细胞的鉴定 | 第43页 |
| 3.2 BPD模型新生大鼠肺原代AT-Ⅱ细胞凋亡及自噬相关指标检测 | 第43-46页 |
| 4 讨论 | 第46-48页 |
| 结论 | 第48-49页 |
| 第三部分 ：改变LC3B-Ⅱ、p62蛋白水平对BPD肺发育结局的影响 | 第49-61页 |
| 1 前言 | 第49-50页 |
| 2 材料和方法 | 第50-53页 |
| 2.1 主要试剂和仪器 | 第50-51页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第50页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第50-51页 |
| 2.2 研究对象和分组 | 第51页 |
| 2.2.1 实验对象 | 第51页 |
| 2.2.2 BPD模型的建立与分组 | 第51页 |
| 2.3 实验方法 | 第51-52页 |
| 2.3.1 肺组织的采集和处理 | 第51页 |
| 2.3.2 HE染色观察肺组织的形态学改变 | 第51-52页 |
| 2.3.3 TUNEL检测凋亡细胞 | 第52页 |
| 2.3.4 药物配制及动物给药方法(见表3-1) | 第52页 |
| 2.3.5 western-blot检测肺组织LC3B-Ⅱ、p62、Lamp1、caspase-3-cleaved的蛋白表达 | 第52页 |
| 2.4 统计学分析 | 第52-53页 |
| 3 结果 | 第53-58页 |
| 3.1 雷帕霉素对自噬相关蛋白及肺泡发育的影响 | 第53-54页 |
| 3.1.1 肺形态学的改变 | 第53页 |
| 3.1.2 western-blot检测caspase3-cleaved、LC3-Ⅱ、p62蛋白表达水平 | 第53-54页 |
| 3.2 氯化锂对自噬相关蛋白及肺泡发育的影响 | 第54-56页 |
| 3.2.1 肺形态学的改变 | 第54页 |
| 3.2.2 western-blot检测caspase3-cleaved、LC3-Ⅱ、p62蛋白表达水平 | 第54-55页 |
| 3.2.3 TUNEL染色观察凋亡细胞 | 第55-56页 |
| 3.3 氯喹对自噬相关蛋白及肺泡发育的影响 | 第56-58页 |
| 3.3.1 肺形态学的改变 | 第56页 |
| 3.3.2 western-blot检测caspase3-cleaved、LC3-Ⅱ、p62蛋白表达水平 | 第56-58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| 第四部分 ：Stx17对BPD新生鼠肺上皮细胞自噬的调节作用研究 | 第61-71页 |
| 1 前言 | 第61页 |
| 2 材料和方法 | 第61-64页 |
| 2.1 主要试剂和仪器 | 第61-62页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第62页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第62页 |
| 2.2 研究对象和分组 | 第62页 |
| 2.2.1 实验对象(体内实验) | 第62页 |
| 2.2.2 BPD模型的建立与分组(体内实验) | 第62页 |
| 2.2.3 高氧暴露细胞模型的建立与分组(体外实验) | 第62页 |
| 2.3 实验方法 | 第62-63页 |
| 2.3.1 肺组织的采集和处理 | 第62页 |
| 2.3.2 免疫荧光观察Stx17表达及定位 | 第62页 |
| 2.3.3 western-blot检测肺组织Stx17的蛋白表达 | 第62页 |
| 2.3.4 Realtime-PCR检测肺组织Stx17的mRNA表达 | 第62-63页 |
| 2.3.5 自噬干预试剂配制(体外实验) | 第63页 |
| 2.3.6 MTT法检测高氧暴露模型原代AT-Ⅱ细胞及应用自噬干预药物后细胞的增殖情况 | 第63页 |
| 2.4 统计学分析 | 第63-64页 |
| 3 结果 | 第64-69页 |
| 3.1 BPD模型新生大鼠肺组织Stx17的表达 | 第64-65页 |
| 3.1.1 体免疫荧光观察Stx17表达及定位 | 第64页 |
| 3.1.2 western-blot检测Stx17的蛋白水平表达 | 第64-65页 |
| 3.1.3 Real-timePCR检测Stx17的mRNA水平的表达 | 第65页 |
| 3.2 BPD肺组织Stx17与LC3B-Ⅱ蛋白表达相关性 | 第65-66页 |
| 3.3 原代AT-Ⅱ细胞高氧暴露模型自噬相关蛋白LC3B-Ⅱ、p62及Stx17的表达 | 第66-67页 |
| 3.4 自噬干预药物对高氧暴露细胞原代AT-Ⅱ细胞的自噬相关蛋白表达的影响 | 第67-69页 |
| 3.4.1 MTT法检测不同自噬干预药物对原代AT-Ⅱ细胞氧化应激模型的存活及增殖的影响 | 第67页 |
| 3.4.2 自噬促进剂雷帕霉素(RAPA)对AT-Ⅱ细胞高氧暴露模型自噬凋亡水平的影响 | 第67-68页 |
| 3.4.3 自噬干预药物对原代AT-Ⅱ细胞高氧暴露模型Stx17表达的影响 | 第68-69页 |
| 4 讨论 | 第69-70页 |
| 5 结论 | 第70-71页 |
| 本研究创新性的自我评价 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-78页 |
| 综述 | 第78-93页 |
| 参考文献 | 第86-93页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第93-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 个人简历 | 第95页 |
