| 中文摘要 | 第20-24页 |
| ABSTRACT | 第24-28页 |
| 符号说明 | 第29-31页 |
| 前言 | 第31-42页 |
| 一. 联合用药在肿瘤治疗中的应用 | 第32-35页 |
| 1. 联合用药原则 | 第32页 |
| 2. 常用联合用药组合方式 | 第32-35页 |
| 2.1 细胞毒药物间联用 | 第32-34页 |
| 2.2 细胞毒药物与核酸类药物联用 | 第34页 |
| 2.3 细胞毒药物与增敏剂联用 | 第34-35页 |
| 二. 神经酰胺在联合抗肿瘤中的应用 | 第35-38页 |
| 1. 神经酰胺结构及其来源 | 第36-37页 |
| 2. 神经酰胺生理活性及抗肿瘤机制研究 | 第37-38页 |
| 三. 纳米载体在联合抗肿瘤方案中的应用 | 第38-40页 |
| 1. 常见的共递送纳米载体 | 第38-39页 |
| 2. 脂质纳米混悬剂在共递送药物中的应用 | 第39-40页 |
| 四. 课题设计 | 第40-42页 |
| 1. 基于神经酰胺的联合抗肿瘤方案筛选 | 第41页 |
| 2. 神经酰胺-多西他赛协同抗肿瘤机制研究 | 第41页 |
| 3. 神经酰胺-多西他赛脂质纳米混悬剂协同抗肿瘤研究 | 第41-42页 |
| 第一部分. 基于神经酰胺的联合抗肿瘤方案筛选 | 第42-55页 |
| 一、材料 | 第42-44页 |
| 1. 试剂与药品 | 第42-43页 |
| 2. 主要仪器 | 第43页 |
| 3. 细胞 | 第43页 |
| 4. 试剂配制 | 第43-44页 |
| 4.1 磷酸盐缓冲液(pH 7.4,0.1 M,10×PBS) | 第43-44页 |
| 二、实验方法 | 第44-46页 |
| 1. 细胞毒性实验 | 第44-45页 |
| 2. 联用协同指数评价 | 第45页 |
| 3. 联用比例对协同作用影响 | 第45-46页 |
| 4. 给药顺序对协同作用影响 | 第46页 |
| 三、实验结果 | 第46-53页 |
| 1. 最佳联用药物的筛选 | 第46-51页 |
| 1.1 CE+DTX细胞毒性考察 | 第46-47页 |
| 1.2 CE+PTX细胞毒性考察 | 第47-48页 |
| 1.3 CE+DOX细胞毒性考察 | 第48-49页 |
| 1.4 联用指数评价 | 第49-51页 |
| 2. CE+DTX最佳联用比例筛选 | 第51-52页 |
| 3. CE+DTX最佳给药顺序筛选 | 第52-53页 |
| 四、 讨论 | 第53-54页 |
| 五、 本章小结 | 第54-55页 |
| 第二部分. 神经酰胺-多西他赛协同抗肿瘤机制研究 | 第55-77页 |
| 一、材料 | 第55-57页 |
| 1. 试剂与药品 | 第55-56页 |
| 2. 主要仪器 | 第56页 |
| 3. 细胞 | 第56页 |
| 4. 动物 | 第56页 |
| 5. 试剂配制 | 第56-57页 |
| 5.1 4%多聚甲醛溶液 | 第56页 |
| 5.2 30% Triton X-100浓储液 | 第56-57页 |
| 5.3 5% BSA溶液 | 第57页 |
| 5.4 Hoechst 33342浓储液 | 第57页 |
| 二、实验方法 | 第57-61页 |
| 1. CE+DTX诱导凋亡实验 | 第57-58页 |
| 2. CE+DTX激活Caspase-3活性 | 第58-59页 |
| 2.1 底物pNA标准曲线建立 | 第58页 |
| 2.2 蛋白标准曲线建立 | 第58页 |
| 2.3 Caspase-3活性检测 | 第58-59页 |
| 3. CE+DTX细胞周期阻滞效应 | 第59页 |
| 4. 细胞骨架破坏实验 | 第59-60页 |
| 4.1 细胞骨架破坏定性评价 | 第59-60页 |
| 4.2 细胞骨架破坏定量评价 | 第60页 |
| 5. CE+DTX体内药效实验 | 第60-61页 |
| 三、实验结果 | 第61-75页 |
| 1. CE+DTX诱导凋亡结果 | 第61-63页 |
| 2. CE+DTX激活Caspase-3活性实验结果 | 第63-66页 |
| 2.1 标准曲线建立 | 第64页 |
| 2.2 蛋白标准曲线建立 | 第64-65页 |
| 2.3 Caspase-3活性检测 | 第65-66页 |
| 3. CE+DTX细胞周期实验结果 | 第66-69页 |
| 4. CE+DTX细胞骨架破坏实验结果 | 第69-72页 |
| 5. CE+DTX体内抑瘤效果 | 第72-75页 |
| 四、讨论 | 第75-76页 |
| 五、本章小结 | 第76-77页 |
| 第三部分. 神经酰胺-多西他赛药物含量测定方法 | 第77-91页 |
| 一、材料 | 第77页 |
| 1. 试剂与药品 | 第77页 |
| 2. 主要仪器 | 第77页 |
| 二、实验方法 | 第77-81页 |
| 1. DTX含量测定方法建立 | 第77-79页 |
| 1.1 检测波长的确定 | 第78页 |
| 1.2 色谱条件 | 第78页 |
| 1.3 标准曲线的建立 | 第78页 |
| 1.4 最低检测限和最低定量限的测定 | 第78页 |
| 1.5 日内、日间精密度 | 第78-79页 |
| 1.6 方法回收率 | 第79页 |
| 1.7 加样回收率 | 第79页 |
| 2. CE含量测定方法建立 | 第79-80页 |
| 2.1 NBD-CE激发波长、发射波长的确定 | 第79页 |
| 2.2 光谱条件 | 第79-80页 |
| 2.3 标准曲线的建立 | 第80页 |
| 2.4 日内、日间精密度 | 第80页 |
| 2.5 方法回收率 | 第80页 |
| 2.6 加样回收率 | 第80页 |
| 3. 脂质纳米混悬剂中药物含量测定 | 第80-81页 |
| 3.1 纳米混悬剂中DTX含量测定 | 第81页 |
| 3.2 纳米混悬剂中CE含量测定 | 第81页 |
| 三、结果 | 第81-89页 |
| 1. DTX含量测定方法考察结果 | 第81-85页 |
| 1.1 检测波长的确定 | 第81-82页 |
| 1.2 色谱条件的确定 | 第82-83页 |
| 1.3 DTX标准曲线 | 第83页 |
| 1.4 最低检测量和最低定量限的测定结果 | 第83页 |
| 1.5 日内、日间精密度实验结果 | 第83-84页 |
| 1.6 方法回收率实验结果 | 第84页 |
| 1.7 加样回收率 | 第84-85页 |
| 2. CE含量测定方法考察结果 | 第85-89页 |
| 2.1 激发波长、发射波长的确定 | 第85-86页 |
| 2.2 光谱条件的确定 | 第86页 |
| 2.3 NBD-CE标准曲线的建立 | 第86-87页 |
| 2.4 日内、日间精密度实验结果 | 第87-88页 |
| 2.6 方法回收率实验结果 | 第88页 |
| 2.7 加样回收率实验结果 | 第88-89页 |
| 四、讨论 | 第89-90页 |
| 五、本章小结 | 第90-91页 |
| 第四部分. 共载神经酰胺-多西他赛脂质纳米混悬剂的制备及协同抗肿瘤研究 | 第91-124页 |
| 一、材料 | 第92-93页 |
| 1. 试剂与药品 | 第92页 |
| 2. 主要仪器 | 第92-93页 |
| 3. 细胞 | 第93页 |
| 4. 动物 | 第93页 |
| 二、实验方法 | 第93-101页 |
| 1. 共载神经酰胺-多西他赛脂质纳米混悬剂的制备 | 第93-94页 |
| 1.1 CE+DTX-LNS制备工艺 | 第93页 |
| 1.2 等渗调节剂用量考察 | 第93-94页 |
| 1.3 CE+DTX浓度考察 | 第94页 |
| 2. CE+DTX-LNS理化性质评价 | 第94页 |
| 2.1 外观形态观察 | 第94页 |
| 2.2 粒径分布及zeta电位的测定 | 第94页 |
| 2.3 样品重现性考察 | 第94页 |
| 3. CE+DTX-LNS冻干制剂的制备 | 第94-95页 |
| 3.1 冻干工艺考察 | 第94-95页 |
| 3.2 冻干保护剂选择 | 第95页 |
| 3.3 冻干保护剂用量考察 | 第95页 |
| 4. CE+DTX-LNS冻干制剂理化性质评价 | 第95-96页 |
| 4.1 外观形态观察 | 第95页 |
| 4.2 粒径分布及Zeta电位的测定 | 第95页 |
| 4.3 三批样品重现性 | 第95-96页 |
| 5. CE+DTX-LNS稳定性考察 | 第96页 |
| 5.1 不同分散介质中的稳定性 | 第96页 |
| 5.2 初步稳定性考察 | 第96页 |
| 6. CE+DTX-LNS体外释放方法学建立 | 第96-98页 |
| 6.1 DTX体外释放方法学建立 | 第96-97页 |
| 6.1.1 色谱条件 | 第96页 |
| 6.1.2 标准曲线的建立 | 第96-97页 |
| 6.1.3 DTX在PBS(含0.5% Tween80)中的精密度考察 | 第97页 |
| 6.1.4 DTX在PBS(含0.5% Tween80)中的回收率考察 | 第97页 |
| 6.2 CE体外释放方法学建立 | 第97-98页 |
| 6.2.1 光谱条件 | 第97页 |
| 6.2.2 标准曲线的建立 | 第97页 |
| 6.2.3 CE在PBS(含0.5% Tween80)中的精密度考察 | 第97-98页 |
| 6.2.4 CE在PBS(含0.5% Tween80)中的回收率考察 | 第98页 |
| 7. CE+DTX-LNS体外释放度测定 | 第98页 |
| 8. CE+DTX-LNS体外细胞毒性考察 | 第98-99页 |
| 9. CE+DTX-LNS体外诱导凋亡实验 | 第99页 |
| 10. CE+DTX-LNS体外共递送效率评价 | 第99-100页 |
| 11. CE+DTX-LNS体内组织分布 | 第100页 |
| 12. CE+DTX-LNS体内药效评价 | 第100-101页 |
| 13. 体内安全性评价 | 第101页 |
| 三、结果与分析 | 第101-121页 |
| 1. CE+DTX-LNS的制备 | 第101-103页 |
| 1.1 等渗调节剂用量考察 | 第101-102页 |
| 1.2 CE+DTX浓度考察 | 第102-103页 |
| 2. CE+DTX-LNS理化性质考察 | 第103-104页 |
| 2.1 CE+DTX-LNS形态、粒径、电位测定 | 第103-104页 |
| 2.2 CE+DTX-LNS重现性考察 | 第104页 |
| 3. CE+DTX-LNS冻干制剂的制备 | 第104-105页 |
| 3.1 CE+DTX-LNS冻干保护剂用量 | 第104-105页 |
| 4. CE+DTX-LNS冻干制剂理化性质评价 | 第105-106页 |
| 4.1 CE+DTX-LNS冻干制剂形态、粒径、电位测定 | 第105页 |
| 4.2 CE+DTX-LNS冻干制剂重现性考察 | 第105-106页 |
| 5. CE+DTX-LNS稳定性考察 | 第106-107页 |
| 5.1 不同分散介质中的稳定性 | 第106-107页 |
| 5.2 初步稳定性考察 | 第107页 |
| 6. CE+DTX-LNS体外释放方法学建立 | 第107-110页 |
| 6.1 DTX体外释放方法学建立 | 第107-109页 |
| 6.1.1 DTX标准曲线的建立 | 第107-108页 |
| 6.1.2 DTX在PBS(含0.5% Tween80)中的精密度考察 | 第108页 |
| 6.1.3 DTX在PBS(含0.5% Tween80)中的回收率考察 | 第108-109页 |
| 6.2 CE体外释放方法学建立 | 第109-110页 |
| 6.2.1 NBD-CE标准曲线的建立 | 第109页 |
| 6.2.2 NBD-CE在PBS(含0.5% Tween80)中的精密度考察 | 第109-110页 |
| 6.2.3 NBD-CE在PBS(含0.5% Tween80)中的回收率考察 | 第110页 |
| 7. CE+DTX-LNS体外释放度考察 | 第110-111页 |
| 8. CE+DTX-LNS体外细胞毒性考察 | 第111-112页 |
| 9. CE+DTX-LNS诱导凋亡能力考察 | 第112-114页 |
| 10. CE+DTX-LNS体外共递送效率考察 | 第114-115页 |
| 11. CE+DTX-LNS体内分布考察 | 第115-117页 |
| 12. CE+DTX-LNS体内药效考察 | 第117-120页 |
| 13. Blank-LNS体内安全性考察 | 第120-121页 |
| 四、讨论 | 第121-123页 |
| 五、本章小结 | 第123-124页 |
| 总结与展望 | 第124-127页 |
| 一. 结论 | 第124-125页 |
| 二. 创新点 | 第125-126页 |
| 三. 展望 | 第126-127页 |
| 参考文献 | 第127-136页 |
| 致谢 | 第136-137页 |
| 攻读学位期间发表论文目录 | 第137-138页 |
| 中文综述 | 第138-148页 |
| 参考文献 | 第144-148页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第148页 |
