| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-9页 |
| 第一章 绪论 | 第12-19页 |
| 1.1 PG的作用 | 第12-13页 |
| 1.2 PG的基础信息及发现历史 | 第13-15页 |
| 1.3 PG的应用 | 第15-16页 |
| 1.4 枯草芽孢杆菌表达系统简介 | 第16-17页 |
| 1.5 课题的研究背景及意义 | 第17-19页 |
| 第二章 PG在枯草芽孢杆菌中的表达策略 | 第19-45页 |
| 2.1 前言 | 第19-20页 |
| 2.2 试验材料 | 第20-25页 |
| 2.2.1 菌株及质粒 | 第20-21页 |
| 2.2.2 引物 | 第21页 |
| 2.2.3 药品 | 第21-22页 |
| 2.2.4 培养基及试验所用溶液 | 第22-24页 |
| 2.2.5 仪器和设备 | 第24-25页 |
| 2.3 试验方法 | 第25-32页 |
| 2.3.1 菌种保存 | 第25页 |
| 2.3.2 对PG针对枯草芽孢杆菌的密码子优化 | 第25页 |
| 2.3.3 枯草芽孢杆菌的电转化法 | 第25页 |
| 2.3.4 PG成熟酶形式(mPG)表达载体的构建、转化和表达 | 第25-29页 |
| 2.3.5 PG带前肽形式(pro-PG)表达载体的构建、转化和表达 | 第29-30页 |
| 2.3.6 PG活性的测定方法 | 第30-31页 |
| 2.3.7 乙醇沉淀法浓缩发酵液上清蛋白质 | 第31-32页 |
| 2.4 结果与分析 | 第32-44页 |
| 2.4.1 PG针对枯草芽孢杆菌的密码子优化 | 第32-36页 |
| 2.4.2 PG在枯草芽孢杆菌中以成熟酶形式表达 | 第36-38页 |
| 2.4.3 PG在枯草芽孢杆菌中以带前肽形式表达 | 第38-44页 |
| 2.5 本章小结 | 第44-45页 |
| 第三章 pro-PG的加工策略 | 第45-61页 |
| 3.1 前言 | 第45-46页 |
| 3.2 试验材料 | 第46页 |
| 3.2.1 菌株、质粒 | 第46页 |
| 3.2.2 药品 | 第46页 |
| 3.2.3 培养基和试剂 | 第46页 |
| 3.2.4 仪器和设备 | 第46页 |
| 3.3 试验方法 | 第46-50页 |
| 3.3.1 胰蛋白酶对pro-PG的加工 | 第46-47页 |
| 3.3.2 碱性蛋白酶和中性蛋白酶对pro-PG的加工 | 第47-48页 |
| 3.3.3 四株枯草芽孢杆菌宿主菌的蛋白酶活性观察 | 第48页 |
| 3.3.4 重组质粒pHT43-pp在枯草芽孢杆菌168和DB403中的表达 | 第48页 |
| 3.3.5 重组菌pHT43-pp/168和pHT43-pp/DB403的生长曲线 | 第48页 |
| 3.3.6 重组菌pHT43-pp/168和pHT43-pp/DB403的代谢特征分析 | 第48-49页 |
| 3.3.7 重组菌pHT43-pp/168和pHT43-pp/DB403的质粒稳定性分析 | 第49-50页 |
| 3.4 结果与分析 | 第50-59页 |
| 3.4.1 由胰蛋白酶(酶解)加工的PG活性 | 第50-53页 |
| 3.4.2 由碱性蛋白酶和中性蛋白酶加工的PG活性 | 第53-54页 |
| 3.4.3 重组质粒pHT43-pp在枯草芽孢杆菌DB403和168中的表达 | 第54-56页 |
| 3.4.4 重组菌pHT43-pp/168和pHT43-pp/DB403的生长曲线 | 第56-57页 |
| 3.4.5 重组菌pHT43-pp/168和pHT43-pp/DB403的代谢特征分析 | 第57-58页 |
| 3.4.6 重组菌pHT43-pp/168和pHT43-pp/DB403的质粒稳定性 | 第58-59页 |
| 3.5 本章小结 | 第59-61页 |
| 第四章 mPG的制备、纯化和酶学性质 | 第61-80页 |
| 4.1 前言 | 第61页 |
| 4.2 材料和方法 | 第61-63页 |
| 4.2.1 菌株及质粒 | 第61页 |
| 4.2.2 药品 | 第61-62页 |
| 4.2.3 引物 | 第62页 |
| 4.2.4 培养基及试剂 | 第62-63页 |
| 4.2.5 仪器和设备 | 第63页 |
| 4.3 试验方法 | 第63-67页 |
| 4.3.1 带His标签的pro-PG的重组质粒的构建及表达 | 第63-66页 |
| 4.3.2 带His标签蛋白的纯化 | 第66页 |
| 4.3.3 PG活性测定方法 | 第66-67页 |
| 4.3.4 蛋白质浓度测定 | 第67页 |
| 4.3.5 酶学性质 | 第67页 |
| 4.4 结果与分析 | 第67-79页 |
| 4.4.1 带His标签的pro-PG的重组质粒的构建及表达 | 第67-70页 |
| 4.4.2 带His标签的pro-PG和mPG的纯化 | 第70-73页 |
| 4.4.3 枯草芽孢杆菌工程菌产的PG的性质分析 | 第73-79页 |
| 4.5 本章小结 | 第79-80页 |
| 全文总结与展望 | 第80-82页 |
| 参考文献 | 第82-87页 |
| 致谢 | 第87页 |
