| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 中英文缩略表 | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-43页 |
| 1. 细胞培养 | 第18-19页 |
| 1.1 细胞复苏 | 第18页 |
| 1.2 细胞传代 | 第18-19页 |
| 1.3 细胞冻存 | 第19页 |
| 2. 过表达质粒的构建 | 第19-28页 |
| 2.1 Sp5过表达质粒的构建 | 第19-27页 |
| 2.2 Nanog过表达质粒的构建 | 第27页 |
| 2.3 Sp5~(△ Zn)结构缺失突变体过表达质粒的构建 | 第27-28页 |
| 3. 相应的稳定过表达细胞株的构建 | 第28-29页 |
| 3.1 细胞转染 | 第28-29页 |
| 3.2 细胞筛选 | 第29页 |
| 4. 低表达质粒及低表达细胞株的构建 | 第29-33页 |
| 4.1 Sp5低表达质粒的构建 | 第30-32页 |
| 4.2 Nanog低表达质粒的构建 | 第32页 |
| 4.3 慢病毒包被 | 第32-33页 |
| 4.4 细胞感染及筛选 | 第33页 |
| 5. Sp5敲除细胞株的构建(CRISPR/Cas9 system) | 第33-36页 |
| 6. 拟胚体(EB)的形成 | 第36页 |
| 7. 表型鉴定 | 第36-43页 |
| 7.1 碱性磷酸酶染色(Alkaline phosphatase staining, AP) | 第36-37页 |
| 7.2 蛋白免疫印迹(Western Blot,WB) | 第37-39页 |
| 7.3 实时定量PCR(qRT-PCR) | 第39-40页 |
| 7.4 免疫荧光染色(Immunofluorescence staining,IF) | 第40-41页 |
| 7.5 染色质免疫共沉淀(Chromatin immunoprecipitation,ChIP) | 第41-43页 |
| 第三章 结果 | 第43-51页 |
| 1. LIF/STAT3信号通路中Sp5下游靶基因的鉴定 | 第43-45页 |
| 2. Sp5直接调控Nanog的启动子 | 第45-46页 |
| 3. Sp5通过调控Nanog发挥维持mESCs自我更新的能力 | 第46-48页 |
| 3.1 下调Nanog会损害mESCs维持自我更新的能力 | 第46-47页 |
| 3.2 Sp5也具有和Nanog相似的抑制mESCs向原始内胚层分化的能力 | 第47-48页 |
| 4. Sp5的Zn指结构对于其维持mESCs自我更新至关重要 | 第48-51页 |
| 第四章 讨论 | 第51-54页 |
| 第五章 结论 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 附录 | 第60-64页 |
| 致谢 | 第64-66页 |
| 研究生期间发表论文 | 第66页 |
