| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 缩写词 | 第5-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-21页 |
| 1.1 抗菌肽的研究进展 | 第11-19页 |
| 1.1.1 抗菌肽的作用 | 第11页 |
| 1.1.2 抗菌肽的应用前景 | 第11-14页 |
| 1.1.2.1 抗菌肽在医药方面的应用 | 第11-12页 |
| 1.1.2.2 抗菌肽在食品方面的应用 | 第12-13页 |
| 1.1.2.3 抗菌肽在养殖方面的应用 | 第13页 |
| 1.1.2.4 抗菌肽在农业方面的应用 | 第13-14页 |
| 1.1.2.5 抗菌肽在其他方面的应用 | 第14页 |
| 1.1.3 抗菌肽的抑菌机理 | 第14-15页 |
| 1.1.4 抗菌肽的提取方法 | 第15页 |
| 1.1.5 抗菌肽的基因工程表达 | 第15-17页 |
| 1.1.5.1 大肠杆菌表达体系 | 第15-16页 |
| 1.1.5.2 酵母表达体系 | 第16-17页 |
| 1.1.6 牛乳铁蛋白肽(LfcinB) | 第17-19页 |
| 1.1.6.1 牛乳铁蛋白肽的功能 | 第18页 |
| 1.1.6.2 牛乳铁蛋白肽的应用 | 第18-19页 |
| 1.2 本文的主要内容和研究意义 | 第19-21页 |
| 1.2.1 主要内容 | 第19页 |
| 1.2.2 研究意义 | 第19-21页 |
| 第二章 抗菌肽LfcinB与绿色荧光蛋白EGFP在酿酒酵母中的融合表达 | 第21-41页 |
| 2.1 引论 | 第21-22页 |
| 2.2 材料 | 第22-25页 |
| 2.2.1 主要仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.2.2 菌株和载体 | 第23页 |
| 2.2.3 主要溶液及常用试剂的配制 | 第23-25页 |
| 2.3 方法 | 第25-36页 |
| 2.3.1 基因引物的设计与合成 | 第25-26页 |
| 2.3.2 牛乳铁蛋白肽LfcinB基因的PCR扩增 | 第26-27页 |
| 2.3.3 mApple基因的扩增 | 第27-28页 |
| 2.3.4 PCR产物清洁试剂盒回收目的基因 | 第28页 |
| 2.3.5 PCR回收产物的磷酸化反应及平末端连接 | 第28-29页 |
| 2.3.5.1 PCR回收产物的磷酸化反应体系 | 第28-29页 |
| 2.3.5.2 平末端连接反应体系 | 第29页 |
| 2.3.6 连接片段LfcinB-mApple的扩增 | 第29-30页 |
| 2.3.7 质粒和LfcinB-mApple双酶切 | 第30-31页 |
| 2.3.8 双酶切质粒和LfcinB-mApple连接 | 第31页 |
| 2.3.9 制备大肠杆菌(DH5α)感受态细胞 | 第31-32页 |
| 2.3.10 连接产物转入大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第32页 |
| 2.3.11 pYES2- α-LfcinB-mApple重组质粒的提取 | 第32-33页 |
| 2.3.12 酿酒酵母(W303)感受态细胞的制备及转化 | 第33-35页 |
| 2.3.13 重组酵母菌的荧光检测 | 第35页 |
| 2.3.14 重组酵母菌W303的生长曲线 | 第35页 |
| 2.3.15 LfcinB-mApple抑菌活性的检测 | 第35-36页 |
| 2.4 结果 | 第36-40页 |
| 2.4.1 基因PCR扩增产物的检测 | 第36页 |
| 2.4.2 重组表达质粒pYES2-α-LfcinB-mApple的鉴定 | 第36-37页 |
| 2.4.3 重组酵母细胞荧光的检测 | 第37页 |
| 2.4.4 重组酵母菌的生长曲线 | 第37-38页 |
| 2.4.5 重组酵母的抑菌活性 | 第38-40页 |
| 2.5 讨论 | 第40-41页 |
| 第三章 抗菌肽LfcinB与绿色荧光蛋白EGFP在酿酒酵母中的融合表达 | 第41-73页 |
| 3.1 引论 | 第41页 |
| 3.2 材料 | 第41-42页 |
| 3.2.1 主要仪器设备 | 第41-42页 |
| 3.2.2 菌株和载体 | 第42页 |
| 3.3 方法 | 第42-54页 |
| 3.3.1 基因引物的设计与合成 | 第42页 |
| 3.3.2 牛乳铁蛋白肽LfcinB基因的扩增 | 第42-43页 |
| 3.3.3 PEGFP-N1基因的扩增 | 第43-44页 |
| 3.3.4 PCR产物清洁试剂盒回收目的基因 | 第44-45页 |
| 3.3.5 PCR回收产物的磷酸化反应及平末端连接 | 第45-46页 |
| 3.3.5.1 PCR回收产物的磷酸化反应体系 | 第45页 |
| 3.3.5.2 平末端连接反应体系 | 第45-46页 |
| 3.3.6 连接片段LfcinB-EGFP的扩增 | 第46-47页 |
| 3.3.7 重组质粒和LfcinB-EGFP双酶切 | 第47页 |
| 3.3.8 双酶切质粒和LfcinB-EGFP连接 | 第47-48页 |
| 3.3.9 制备大肠杆菌(DH5α)感受态细胞 | 第48页 |
| 3.3.10 连接产物LfcinB-EGFP转入大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第48-49页 |
| 3.3.11 重组质粒pYES2-α-LfcinB-EGFP提取 | 第49-50页 |
| 3.3.12 酿酒酵母(W303、INVSC1)感受态细胞的制备及转化 | 第50-51页 |
| 3.3.13 重组蛋白LfcinB-EGFP的SDS-PAGE分析 | 第51-52页 |
| 3.3.14 重组酵母菌的荧光检测 | 第52-53页 |
| 3.3.15 重组酵母菌的生长曲线 | 第53页 |
| 3.3.16 LfcinB-EGFP抑菌活性的检测 | 第53页 |
| 3.3.17 不同的糖对重组蛋白抑菌活性的影响 | 第53-54页 |
| 3.3.18 pH值的稳定对重组酵母抑菌活性的影响 | 第54页 |
| 3.3.19 不同浓度的Arg对重组酵母的影响 | 第54页 |
| 3.4 结果 | 第54-70页 |
| 3.4.1 基因PCR扩增产物的鉴定 | 第54-55页 |
| 3.4.2 重组表达质粒的鉴定 | 第55-56页 |
| 3.4.3 重组蛋白的SDS-PAGE检测 | 第56-57页 |
| 3.4.4 激光共聚焦观察的荧光图片 | 第57-58页 |
| 3.4.5 重组酵母菌的生长曲线 | 第58-59页 |
| 3.4.6 细胞培养液pH的稳定对重组酵母的影响 | 第59-63页 |
| 3.4.6.1 PBS缓冲液对重组酵母的影响 | 第59-60页 |
| 3.4.6.2 柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液对重组酵母的影响 | 第60-62页 |
| 3.4.6.3 不同浓度的Arg对重组酵母抑菌活性的影响 | 第62-63页 |
| 3.4.7 重组酵母W303诱导表达目的蛋白的抑菌活性 | 第63-65页 |
| 3.4.8 不同的糖、不同宿主菌的抑菌活性比较 | 第65-69页 |
| 3.4.8.1 不同糖培养重组酵母的抑菌活性 | 第66-68页 |
| 3.4.8.2 不同酵母菌株表达重组质粒的抑菌活性比较 | 第68-69页 |
| 3.4.8.3 不同的糖、不同宿主菌的抑菌活性 | 第69页 |
| 3.4.9 融合蛋白LfcinB-EGFP氨基酸序列的糖基化位点 | 第69-70页 |
| 3.5 讨论 | 第70-73页 |
| 第四章 小结 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 攻读学位期间学术成果 | 第83页 |
