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基于酶辅助的新型信号放大策略构建适体—荧光传感器及其应用研究

中文摘要第12-14页
ABSTRACT第14-15页
符号说明第16-17页
第一章 绪论第17-37页
    1.1 引言第17页
    1.2 完整适体和分裂适体第17-18页
    1.3 荧光信号第18-20页
        1.3.1 标记型第18-20页
        1.3.2 免标记型第20页
    1.4 信号扩增策略第20-35页
        1.4.1 酶辅助信号放大第21-30页
            1.4.1.1 聚合酶辅助信号放大第21-22页
            1.4.1.2 切刻酶辅助信号放大第22-24页
            1.4.1.3 聚合酶和切刻酶辅助的信号放大第24-26页
            1.4.1.4 外切酶辅助信号放大第26-27页
            1.4.1.5 内切酶辅助的信号放大第27-28页
            1.4.1.6 末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)辅助信号放大第28-29页
            1.4.1.7 DNAzyme辅助信号放大第29-30页
        1.4.2 无酶辅助信号放大第30-35页
            1.4.2.1 杂交链反应第31-32页
            1.4.2.2 催化发夹自组装第32-33页
            1.4.2.3 杂交链反应和催化发夹自组装联用的信号放大第33-34页
            1.4.2.4 熵驱动的链置换反应第34-35页
    1.5 酶辅助信号放大优势、缺陷及解决方案第35-36页
    1.6 总结第36-37页
第二章 基于目标物和阻滞链循环的信号扩增策略用于腺苷的检测第37-52页
    2.1 引言第37-38页
    2.2 目标物和阻滞链循环策略的设计原理第38-39页
    2.3 仪器与试剂第39-40页
        2.3.1 仪器第39页
        2.3.2 试剂第39-40页
    2.4 实验步骤第40-41页
        2.4.1 高温高压灭菌第40-41页
        2.4.2 捕获链-阻滞链复合物的制备第41页
        2.4.3 T7Exo辅助的目标物和阻滞链循环第41页
        2.4.4 荧光信号的获得及检测第41页
    2.5 结果与讨论第41-51页
        2.5.1 可行性验证第41-42页
        2.5.2 捕获链与阻滞链互补碱基数目的优化第42-43页
        2.5.3 反应条件的优化第43-46页
            2.5.3.1 H1浓度的优化第43-44页
            2.5.3.2 T7 Exo用量的优化第44-45页
            2.5.3.3 反应时间的优化第45-46页
            2.5.3.4 NMM的优化第46页
        2.5.4 传感器标准曲线的建立第46-48页
        2.5.5 方法学验证第48-51页
            2.5.5.1 日内精密度和日间精密度的考察第48页
            2.5.5.2 选择性考察第48-49页
            2.5.5.3 回收率的考察第49-50页
            2.5.5.4 重现性的考察第50页
            2.5.5.5 复杂生物样本中回收率的测定第50-51页
    2.6 结论第51-52页
第三章 目标物替代品介导的基于分裂适体的信号放大策略第52-67页
    3.1 引言第52-53页
    3.2 目标物替代品介导的基于分裂适体的信号放大策略设计原理第53-54页
    3.3 仪器与试剂第54-56页
        3.3.1 仪器第54-55页
        3.3.2 试剂第55-56页
    3.4 实验步骤第56-57页
        3.4.1 高温高压灭菌第56页
        3.4.2 聚丙烯酰胺凝胶电泳验证信号放大是否发生第56页
        3.4.3 目标物替代品介导的信号放大的运行第56页
        3.4.4 目标物替代品介导的信号放大的终止第56-57页
        3.4.5 荧光信号的获得及检测第57页
    3.5 实验结果第57-66页
        3.5.1 聚丙烯酰胺凝胶电泳验证信号扩增是否发生第57-58页
        3.5.2 可行性研究第58-59页
        3.5.3 SA与Q链互补碱基数目的优化第59页
        3.5.4 实验条件的优化第59-62页
            3.5.4.1 Q链浓度的优化第60页
            3.5.4.2 反应时间的优化第60-61页
            3.5.4.3 NMM浓度的优化第61-62页
        3.5.5 标准曲线的建立第62-63页
        3.5.6 方法学验证第63-66页
            3.5.6.1 选择性考察第63-64页
            3.5.6.2 日内精密度和日间精密度考察第64-65页
            3.5.6.3 回收率的考察第65-66页
            3.5.6.4 血清样品中回收率的考察第66页
    3.6 结论第66-67页
总结第67-69页
参考文献第69-77页
致谢第77-78页
学位论文评阅及答辩情况表第78页

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