| 摘要 | 第9-13页 |
| ABSTRACT | 第13-18页 |
| 缩略词及符号说明表 | 第19-20页 |
| 第一章 研究背景及意义 | 第20-40页 |
| 1.1 木质纤维素 | 第20-22页 |
| 1.1.1 木质纤维素的化学组成 | 第20-22页 |
| 1.1.2 农业废弃物资源 | 第22页 |
| 1.2 纤维素乙醇的研究进展 | 第22-31页 |
| 1.2.1 纤维素乙醇产业化现状 | 第22-24页 |
| 1.2.2 木质纤维素乙醇生产工艺 | 第24-29页 |
| 1.2.3 β-木糖苷酶在生物乙醇生产中的重要作用 | 第29-31页 |
| 1.3 β-木糖苷酶的研究进展 | 第31-36页 |
| 1.3.1 木糖苷酶的分类 | 第31页 |
| 1.3.2 β-木糖苷酶的酶学性质 | 第31-32页 |
| 1.3.3 β-木糖苷酶结构与催化机制 | 第32-33页 |
| 1.3.4 β-木糖苷酶基因的克隆表达 | 第33-35页 |
| 1.3.5 β-木糖苷酶的生产现状 | 第35页 |
| 1.3.6 多功能β-木糖苷酶 | 第35-36页 |
| 1.4 本论文的立题依据及研究内容 | 第36-40页 |
| 第二章 草酸青霉木糖苷酶的异源表达及应用潜力评价 | 第40-66页 |
| 引言 | 第40页 |
| 2.1 材料与方法 | 第40-53页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第40-41页 |
| 2.1.2 主要耗材及仪器 | 第41-42页 |
| 2.1.3 主要溶剂及缓冲液 | 第42-44页 |
| 2.1.4 底物溶液的配制 | 第44页 |
| 2.1.5 培养基和培养条件 | 第44-45页 |
| 2.1.6 生物信息学分析 | 第45页 |
| 2.1.7 木糖苷酶基因的克隆 | 第45-49页 |
| 2.1.8 木糖苷酶在毕赤酵母中异源表达 | 第49-52页 |
| 2.1.9 不同酶活力及蛋白浓度的测定 | 第52页 |
| 2.1.10 粗酶液最适pH测定 | 第52页 |
| 2.1.11 木聚糖的酶水解 | 第52-53页 |
| 2.2 结果与讨论 | 第53-63页 |
| 2.2.1 草酸青霉木糖苷酶的生物信息学分析 | 第53-57页 |
| 2.2.2 木糖苷酶基因的克隆与异源表达 | 第57-61页 |
| 2.2.3 重组酶蛋白的应用潜力评价 | 第61-63页 |
| 2.3 本章小结 | 第63-66页 |
| 第三章 β-木糖苷酶Xyl43B和Abf43D的酶学性质及与木聚糖酶协同作用研究 | 第66-96页 |
| 引言 | 第66页 |
| 3.1 材料与方法 | 第66-73页 |
| 3.1.1 菌株 | 第66-67页 |
| 3.1.2 培养基和培养条件 | 第67页 |
| 3.1.3 主要耗材及仪器 | 第67页 |
| 3.1.4 主要溶剂及缓冲液 | 第67-68页 |
| 3.1.5 底物溶液的配制 | 第68页 |
| 3.1.6 木质纤维素的碱预处理 | 第68页 |
| 3.1.7 木质纤维素原料的化学成分分析 | 第68-69页 |
| 3.1.8 木聚糖酶的制备 | 第69页 |
| 3.1.9 高产β-木糖苷酶的重组菌株筛选 | 第69页 |
| 3.1.10 重组β-木糖苷酶的分离纯化 | 第69-70页 |
| 3.1.11 SDS-PAGE分析 | 第70页 |
| 3.1.12 重组酶N-糖基化分析 | 第70页 |
| 3.1.13 重组酶的酶学性质分析 | 第70-72页 |
| 3.1.14 Xyl43B和Abf43D的生物信息学分析 | 第72页 |
| 3.1.15 木聚糖和碱预处理玉米秸秆的酶水解 | 第72-73页 |
| 3.2 结果与讨论 | 第73-94页 |
| 3.2.1 高产Xyl43B及Abf43D的菌株筛选及酶的分离纯化 | 第73-75页 |
| 3.2.2 Xyl43B及Abf43D的酶学性质分析 | 第75-84页 |
| 3.2.3 Xyl43B及Abf43D的生物信息学分析 | 第84-88页 |
| 3.2.4 Xyl43B与Abf43D协同木聚糖酶降解木聚糖的研究 | 第88-94页 |
| 3.3 本章小结 | 第94-96页 |
| 第四章 高产β-木糖苷酶Xyl3A的纤维素酶生产菌株构建及在纤维底物糖化发酵中的应用研究 | 第96-118页 |
| 引言 | 第96-97页 |
| 4.1 材料与方法 | 第97-106页 |
| 4.1.1 菌株及质粒 | 第97页 |
| 4.1.2 主要耗材及仪器 | 第97-98页 |
| 4.1.3 主要溶剂及缓冲液 | 第98-99页 |
| 4.1.4 底物溶液的配制 | 第99页 |
| 4.1.5 玉米秸秆的碱性预处理及其化学成分分析 | 第99页 |
| 4.1.6 培养基和培养条件 | 第99页 |
| 4.1.7 纤维素的酶水解 | 第99页 |
| 4.1.8 青霉基因组DNA的提取 | 第99-101页 |
| 4.1.9 产β-木糖苷酶Xyl3A的纤维素酶菌株构建 | 第101-104页 |
| 4.1.10 重组菌株发酵产酶分析 | 第104-105页 |
| 4.1.11 糖化发酵生产乙醇 | 第105-106页 |
| 4.2 结果与讨论 | 第106-116页 |
| 4.2.1 碱预处理后玉米秸秆的化学成分含量分析 | 第106页 |
| 4.2.2 添加Xyl3A对纤维素酶RE-10糖化能力影响 | 第106-107页 |
| 4.2.3 高产β-木糖苷酶Xyl3A的纤维素酶菌株构建 | 第107-113页 |
| 4.2.4 RGXyl-1在半同步糖化发酵产乙醇中的应用 | 第113-116页 |
| 4.3 本章小结 | 第116-118页 |
| 第五章 β-木糖苷酶和β-葡萄糖苷酶的共表达及在纤维底物糖化发酵中的应用研究 | 第118-140页 |
| 引言 | 第118-119页 |
| 5.1 材料与方法 | 第119-125页 |
| 5.1.1 菌株及质粒 | 第119页 |
| 5.1.2 主要耗材及仪器 | 第119页 |
| 5.1.3 主要溶剂及缓冲液 | 第119页 |
| 5.1.4 底物溶液的配制 | 第119-120页 |
| 5.1.5 碱性预处理木质纤维素及其化学成分分析 | 第120页 |
| 5.1.6 利用Red/ET重组技术构建共表达盒的重组质粒 | 第120-124页 |
| 5.1.7 β-木糖苷酶和β-葡萄糖苷酶共表达菌株的构建 | 第124页 |
| 5.1.8 表型分析 | 第124页 |
| 5.1.9 共表达菌株发酵产酶分析 | 第124页 |
| 5.1.10 β-葡萄糖苷酶的活性电泳分析 | 第124页 |
| 5.1.11 糖化发酵生产乙醇 | 第124-125页 |
| 5.2 结果与讨论 | 第125-138页 |
| 5.2.1 β-木糖苷酶和β-葡萄糖苷酶共表达菌株的构建 | 第125-129页 |
| 5.2.2 RXB和RAXB菌株的发酵产酶能力分析 | 第129-131页 |
| 5.2.3 菌株RXB和RAXB的胞外蛋白分析 | 第131-133页 |
| 5.2.4 β-木糖苷酶和β-葡萄糖苷酶基因的转录水平分析 | 第133-134页 |
| 5.2.5 菌株RXB-2和RAXB-4在半同步糖化发酵产乙醇中的应用 | 第134-138页 |
| 5.3 本章小结 | 第138-140页 |
| 第六章 多功能糖苷酶Gax3A的酶学性质及对纤维素酶解的促进作用研究 | 第140-158页 |
| 引言 | 第140页 |
| 6.1 材料与方法 | 第140-144页 |
| 6.1.1 菌株及质粒 | 第140-141页 |
| 6.1.2 主要耗材及仪器 | 第141页 |
| 6.1.3 主要溶剂及缓冲液 | 第141页 |
| 6.1.4 底物溶液的配制 | 第141页 |
| 6.1.5 碱预处理木质纤维素及其化学成分分析 | 第141页 |
| 6.1.6 Gax3A表达菌株的构建及发酵产酶 | 第141-143页 |
| 6.1.7 Gax3A分离纯化 | 第143页 |
| 6.1.8 β-葡萄糖苷酶的活性电泳分析 | 第143页 |
| 6.1.9 酶学性质分析 | 第143页 |
| 6.1.10 Gax3A的转糖基活性分析 | 第143-144页 |
| 6.1.11 纤维素的酶水解 | 第144页 |
| 6.2 结果与讨论 | 第144-157页 |
| 6.2.1 Gax3A生物信息学分析 | 第144-145页 |
| 6.2.2 Gax3A表达菌株的构建 | 第145-147页 |
| 6.2.3 Gax3A的分离纯化及检测 | 第147-149页 |
| 6.2.4 Gax3A酶学性质分析 | 第149-155页 |
| 6.2.5 Gax3A对纤维素酶糖化能力的影响 | 第155-157页 |
| 6.3 本章小结 | 第157-158页 |
| 全文总结与展望 | 第158-160页 |
| 参考文献 | 第160-176页 |
| 攻读学位期间已(待)发表学术论文 | 第176-178页 |
| 致谢 | 第178-180页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第180页 |
