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ADAM9在酒精性肝损伤过程中的功能研究

摘要第2-4页
abstract第4-5页
第1章 绪论第9-19页
    1.1 酒精性肝损伤第9-10页
        1.1.1 病理特点第9-10页
        1.1.2 酒精性肝损伤动物模型第10页
    1.2 酒精性肝损伤过程中分子调控机制研究第10-13页
        1.2.1 CYP2E1与酒精性肝损伤第10-11页
        1.2.2 应激分子与酒精性肝损伤第11-12页
        1.2.3 TGF-βl与酒精性肝损伤第12页
        1.2.4 肝细胞凋亡与酒精性肝损伤第12-13页
    1.3 ADAM9介绍第13-14页
    1.4 CRISPRCas9系统发现与分类第14-19页
        1.4.1 CRISPR/Cas9系统的作用机理第14-15页
        1.4.2 CRISPR/Cas9系统清除外源性DNA原理第15页
        1.4.3 CRISPR/Cas9系统构建第15-16页
        1.4.4 降低CRISPR/Cas技术基因编辑脱靶效率的研究第16-19页
第2章 前言第19-21页
第3章 材料与方法第21-37页
    3.1 实验材料第21-25页
        3.1.1 细胞和质粒第21页
        3.1.2 实验动物第21页
        3.1.3 实验仪器第21页
        3.1.4 实验试剂及溶液配制第21-25页
    3.2 实验方法第25-35页
        3.2.1 实验设计第25-26页
        3.2.2 CRISPR/Cas9技术靶向突变小鼠Adam9基因三合一质粒构建第26页
        3.2.3 细菌培养第26-27页
        3.2.4 质粒提取第27-28页
        3.2.5 细胞培养第28页
        3.2.6 细胞转染第28-29页
        3.2.7 最佳嘌呤酶素浓度第29页
        3.2.8 嘌呤酶素筛选第29页
        3.2.9 PCR技术检测第29-30页
        3.2.10 小鼠尾静脉注射第30-31页
        3.2.11 动物实验第31页
        3.2.12 血清AST、ALT酶活性的检测第31-32页
        3.2.13 蜡块包埋组织切片制作第32页
        3.2.14 HE染色检测各组小鼠的肝脏损伤情况第32-33页
        3.2.15 PAS法检测各组小鼠肝脏中糖原的表达情况第33页
        3.2.16 Hoechst33258染色法检测各组小鼠的肝细胞凋亡情况第33-34页
        3.2.17 免疫印迹检测蛋白的表达情况第34-35页
    3.3 实验数据的统计学分析第35-37页
第4章 结果第37-41页
    4.1 CRISPR/Cas9技术靶向突变小鼠Adam9基因三合一质粒第37-38页
    4.2 C2C12细胞培养和sgRNA活性验证第38页
    4.3 小鼠血清ALT、AST酶活性的检测结果第38页
    4.4 肝脏组织HE染色结果第38-39页
    4.5 肝脏组织PAS染色结果第39页
    4.6 肝脏组织Hoechst33258染色结果第39页
    4.7 免疫印迹法检测组织蛋白的表达结果第39-41页
第5章 讨论第41-45页
    5.1 小鼠急性酒精性肝损伤中ADAM9与转氨酶和组织损伤的关系第41页
    5.2 小鼠急性酒精性肝损伤中ADAM9和糖原储备的关系第41-42页
    5.3 小鼠急性酒精性肝损伤中ADAM9和细胞凋亡的关系第42页
    5.4 小鼠急性酒精性肝损伤中ADAM9对肝细胞应激分子HSP27、HSP70的影响第42-43页
    5.5 小鼠急性酒精性肝损伤中ADAM9对肝细胞增殖的作用第43页
    5.6 小鼠急性酒精性肝损伤中ADAM9和VEGF的关系第43页
    5.7 小鼠急性酒精性肝损伤中ADAM9和IL-6信号途径的关系第43-44页
    5.8 问题与展望第44-45页
第6章 结论第45-47页
参考文献第47-57页
缩略语词汇表第57-59页
附录Ⅰ 图及说明第59-65页
致谢第65-66页
攻读学位期间的研究成果第66-67页

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