| 摘要 | 第9-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 缩略语表 | 第15-17页 |
| 第1章 文献综述 | 第17-37页 |
| 1 流感病毒的分类 | 第17-18页 |
| 2 流感病毒的结构 | 第18-27页 |
| 3 流感病毒生命周期 | 第27-30页 |
| 3.1 病毒的吸附、侵入与脱壳 | 第27-28页 |
| 3.2 病毒基因组的转录 | 第28-29页 |
| 3.3 病毒基因组的复制 | 第29页 |
| 3.4 病毒基因表达的调控 | 第29页 |
| 3.5 病毒蛋白的合成和子代病毒的装配及释放 | 第29-30页 |
| 4 流感病毒的爆发 | 第30-35页 |
| 4.1 1918西班牙大流感 | 第30-31页 |
| 4.2 1957年亚洲流感 | 第31页 |
| 4.3 1968年香港大流感 | 第31页 |
| 4.4 2009H1N1甲型流感 | 第31-32页 |
| 4.5 H5N1禽流感病毒的爆发流行 | 第32-35页 |
| 5 流感病毒的宿主 | 第35页 |
| 6 流感病毒的传播 | 第35-37页 |
| 第2章 神经毒力H5N1禽流感病毒遗传进化分析及致病性研究 | 第37-61页 |
| 1 材料与方法 | 第38-61页 |
| 1.1 实验材料 | 第38-39页 |
| 1.1.1 病料 | 第38页 |
| 1.1.2 毒株 | 第38页 |
| 1.1.3. 参考血清 | 第38页 |
| 1.1.4 菌株和质粒 | 第38页 |
| 1.1.5 工具酶及主要试剂 | 第38页 |
| 1.1.6 培养基 | 第38-39页 |
| 1.1.7 H5N1禽流感病毒胶体金检测试剂盒 | 第39页 |
| 1.1.8 质粒提取试剂盒 | 第39页 |
| 1.1.9 SPF鸡胚、细胞 | 第39页 |
| 1.1.10 SPF鸡、禽流感抗体阴性鸭子及BALB/c小鼠 | 第39页 |
| 1.1.11 实验室条件 | 第39页 |
| 1.2 实验方法 | 第39-46页 |
| 1.2.1 病毒的分离 | 第39-40页 |
| 1.2.2 病毒鉴定分型 | 第40-41页 |
| 1.2.3 病毒RNA的提取 | 第41页 |
| 1.2.4 反转录RT-PCR | 第41页 |
| 1.2.5 PCR扩增 | 第41-42页 |
| 1.2.6 PCR产物回收 | 第42页 |
| 1.2.7 PCR产物连接 | 第42-43页 |
| 1.2.8 连接产物转化 | 第43页 |
| 1.2.9 重组质粒的鉴定筛选及测序 | 第43页 |
| 1.2.10 流感基因片段的分子生物学特性及序列的进化分析 | 第43-44页 |
| 1.2.11 EID_(50)、TCID_(50)和IVPI的测定 | 第44页 |
| 1.2.12 毒株hm/06 LD_(50测定 | 第44-45页 |
| 1.2.13 毒株hm/06对鸭的回归实验 | 第45页 |
| 1.2.14 毒株hm/06感染鸭各脏器流感病毒分布 | 第45页 |
| 1.2.15 毒株hm/06感染鸡神经病理模型的构建 | 第45-46页 |
| 1.3 结果与分析 | 第46-57页 |
| 1.3.1 病毒分离 | 第46-48页 |
| 1.3.5 毒株hm/06的EID_(50)测定 | 第48-49页 |
| 1.3.6 毒株hm/06对鸡的IVPI测定 | 第49-53页 |
| 1.3.7 毒株hm/06的LD_(50)测定 | 第53-54页 |
| 1.3.8 分离病毒在鸭上的回归实验 | 第54页 |
| 1.3.9 鸭体内的病毒的脏器分布 | 第54-55页 |
| 1.3.10 毒株hm/06感染鸡脑病毒含量测定 | 第55页 |
| 1.3.11 病毒感染鸡脑组织的病理学研究 | 第55-56页 |
| 1.3.12 脑组织的免疫组化及凋亡研究 | 第56-57页 |
| 1.4 讨论 | 第57-61页 |
| 第3章 神经毒力H5N1禽流感病毒感染鸡脑组织和神经细胞的比较蛋白质组研究 | 第61-96页 |
| 1 材料 | 第61-63页 |
| 1.1 病毒、细胞及实验动物 | 第61-62页 |
| 1.2 抗体、蛋白酶抑制剂及siRNA | 第62页 |
| 1.3 试剂 | 第62页 |
| 1.4 仪器设备和软件 | 第62-63页 |
| 2 方法 | 第63-71页 |
| 2.1 主要试剂的配制 | 第63页 |
| 2.2 病毒hm/06感染鸡动物实验及蛋白样品制备 | 第63-64页 |
| 2.3 蛋白浓度测定 | 第64-65页 |
| 2.4 双向凝胶电泳 | 第65-66页 |
| 2.5 凝胶扫描和图像分析 | 第66页 |
| 2.5.1 凝胶扫描 | 第66页 |
| 2.5.2 蛋白质点的检测 | 第66页 |
| 2.5.3 蛋白点的匹配 | 第66页 |
| 2.5.4 表达差异蛋白点的检测 | 第66页 |
| 2.6 挖点 | 第66-67页 |
| 2.7 胶内酶解、质谱鉴定及生物信息学检索 | 第67页 |
| 2.8 Real-time PCR验证差异蛋白的表达 | 第67-68页 |
| 2.8.1 病毒攻毒组和对照组鸡脑组织RNA的提取 | 第67-68页 |
| 2.8.2 RNA反转录cDNA | 第68页 |
| 2.8.3 SYBR Green Master实时荧光定量PCR | 第68页 |
| 2.9 差异蛋白的Western-blot验证 | 第68-69页 |
| 2.10 差异蛋白质参与的信号通路分析 | 第69页 |
| 2.11 毒株hm/06和dw/04对神经细胞SK的TCID_(50)的测定 | 第69-70页 |
| 2.12 病毒hm/06和dw/04感染SK细胞后蛋白样品制备及浓度测定 | 第70页 |
| 2.13 双向电泳、电泳图谱分析及质谱鉴定与信息学检索 | 第70页 |
| 2.14 病毒感染SK细胞后细胞骨架蛋白的变化 | 第70页 |
| 2.15 蛋白酶抑制剂抑制蛋白c-Abl和Cdk5对SK细胞凋亡的影响 | 第70-71页 |
| 2.16 SiRNA抑制蛋白c-Abl和Cdk5对SK细胞凋亡的影响 | 第71页 |
| 2.17 Western blot方法检测siRNA作用后蛋白的表达 | 第71页 |
| 3 结果 | 第71-87页 |
| 3.1 鸡脑组织蛋白样品的制备 | 第71-72页 |
| 3.2 病毒感染鸡脑组织前后蛋白质图谱 | 第72-73页 |
| 3.3 差异蛋白点的质谱分析 | 第73-76页 |
| 3.4 差异蛋白质的Real-time PCR验证 | 第76-77页 |
| 3.5 差异表达蛋白质的Westem-blot验证 | 第77页 |
| 3.6 差异蛋白质参与的信号通路分析 | 第77-79页 |
| 3.7 病毒感染SK细胞后蛋白样品的浓度测定 | 第79页 |
| 3.8 病毒感染SK细胞后的蛋白质双向电泳图谱 | 第79页 |
| 3.9 差异蛋白点的质谱分析 | 第79-83页 |
| 3.10 感染hm/06毒株后SK细胞骨架蛋白的变化 | 第83-85页 |
| 3.11 蛋白酶抑制剂抑制蛋白c-Abl和Cdk5对SK细胞凋亡的影响 | 第85-86页 |
| 3.12 Western blot方法检测蛋白酶抑制剂作用后蛋白的表达 | 第86页 |
| 3.13 SiRNA抑制蛋白c-Abl和Cdk5对SK细胞凋亡的影响 | 第86-87页 |
| 3.14 Western blot方法检测siRNA作用后蛋白的表达 | 第87页 |
| 4 讨论 | 第87-96页 |
| 4.1 病毒蛋白 | 第88-89页 |
| 4.2 骨架系统蛋白 | 第89页 |
| 4.3 神经信号转导相关蛋白 | 第89-91页 |
| 4.4 泛素降解途径相关蛋白 | 第91-92页 |
| 4.5 对宿主翻译机制的影响 | 第92-93页 |
| 4.6 大分子合成及代谢相关蛋白 | 第93-94页 |
| 4.7 差异蛋白参与的神经病理相关信号通路 | 第94页 |
| 4.8 蛋白c-Abl和Cdk5的蛋白酶抑制剂和siRNA作用对病毒造成细胞凋亡的影响 | 第94-95页 |
| 4.9 小结 | 第95-96页 |
| 第4章 H5N1禽流感病毒和H1N1/2009甲型流感病毒混合感染转录组研究 | 第96-110页 |
| 1 材料方法 | 第96-98页 |
| 1.1 病毒及实验动物 | 第96页 |
| 1.2 生物信息学分析软件 | 第96-97页 |
| 1.3 动物试验 | 第97页 |
| 1.4 肺脏组织RNA的提取 | 第97页 |
| 1.5 肺脏RNA的转录组测序 | 第97-98页 |
| 1.6 测序结果的组装及生物信息学分析 | 第98页 |
| 1.7 各实验组命名确定 | 第98页 |
| 2 结果 | 第98-107页 |
| 2.1 动物试验结果 | 第98页 |
| 2.2 肺脏RNA的质量检测 | 第98页 |
| 2.3 各试验组测序结果评估与拼接 | 第98-99页 |
| 2.4 各试验组差异表达基因和转录本的分析 | 第99-100页 |
| 2.5 混合感染特异性差异基因分析 | 第100-101页 |
| 2.6 混合感染特异性相关基因的kegg信号通路富集分析 | 第101-103页 |
| 2.7 差异表达基因的聚类分析 | 第103-104页 |
| 2.8 差异表达基因的选择性剪切分析 | 第104-106页 |
| 2.9 混合感染相关差异基因的协同表达研究 | 第106-107页 |
| 3 讨论 | 第107-109页 |
| 4 小结 | 第109-110页 |
| 总结 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-123页 |
| 致谢 | 第123-125页 |
| 个人简历 | 第125页 |
