| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略语及符号 | 第11-12页 |
| 第一篇 文献综述 | 第12-20页 |
| 1 猪肺炎支原体研究进展 | 第12-15页 |
| 1.1 猪肺炎支原体简介 | 第12页 |
| 1.2 猪肺炎支原体的培养和分离 | 第12-14页 |
| 1.3 猪肺炎支原体的致病机理 | 第14-15页 |
| 2 猪肺炎支原体黏附因子的研究进展 | 第15-20页 |
| 2.1 P97蛋白 | 第15-16页 |
| 2.2 P102蛋白 | 第16页 |
| 2.3 P159蛋白 | 第16页 |
| 2.4 P216蛋白 | 第16-17页 |
| 2.5 P116蛋白 | 第17页 |
| 2.6 Mhp271蛋白 | 第17页 |
| 2.7 Mhp107蛋白 | 第17-20页 |
| 第二篇 研究内容 | 第20-67页 |
| 第一章 猪肺炎支原体P159基因片段的表达及鉴定 | 第20-38页 |
| 1 材料 | 第20-23页 |
| 1.1 质粒和菌株 | 第20页 |
| 1.2 主要试剂 | 第20-21页 |
| 1.3 主要仪器 | 第21页 |
| 1.4 主要溶液配方 | 第21-23页 |
| 2 方法 | 第23-32页 |
| 2.1 引物的设计与合成 | 第23页 |
| 2.2 模板的制备 | 第23-24页 |
| 2.3 Mhp/P159基因的PCR扩增 | 第24-25页 |
| 2.4 Mhp/P159基因的回收纯化 | 第25页 |
| 2.5 Mhp/P159基因与pMD18-T载体的连接 | 第25-26页 |
| 2.6 连接产物的转化 | 第26页 |
| 2.7 重组质粒DNA的提取、鉴定及测序 | 第26-28页 |
| 2.8 原核表达载体pET-28a(+)/P159的构建 | 第28-29页 |
| 2.9 连接产物的转化、重组质粒DNA的提取及鉴定 | 第29页 |
| 2.10 重组质粒的诱导表达及SDS-PAGE检测 | 第29-30页 |
| 2.11 最佳诱导条件的确定 | 第30页 |
| 2.12 融合蛋白的纯化 | 第30-31页 |
| 2.13 表达产物的Western-blot检测 | 第31-32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-37页 |
| 3.1 猪肺炎支原体P159基因的扩增 | 第32页 |
| 3.2 重组质粒pMD18-T/P159的鉴定 | 第32-33页 |
| 3.3 重组质粒pET-28a(+)/P159的鉴定 | 第33-34页 |
| 3.4 重组蛋白的SDS-PAGE结果 | 第34页 |
| 3.5 重组蛋白的表达条件的优化 | 第34-36页 |
| 3.6 重组蛋白的纯化结果 | 第36页 |
| 3.7 重组蛋白的免疫印迹分析 | 第36-37页 |
| 4 讨论 | 第37页 |
| 小结 | 第37-38页 |
| 第二章 猪肺炎支原体P216基因片段的表达及鉴定 | 第38-60页 |
| 1 材料 | 第38-39页 |
| 1.1 质粒和菌株 | 第38页 |
| 1.2 主要试剂 | 第38页 |
| 1.3 主要仪器 | 第38-39页 |
| 1.4 主要溶液配方 | 第39页 |
| 2 方法 | 第39-50页 |
| 2.1 引物的设计与合成 | 第39-40页 |
| 2.2 模板的制备 | 第40页 |
| 2.3 突变前Mhp/P216基因的PCR扩增 | 第40页 |
| 2.4 突变前Mhp/P216基因的回收纯化 | 第40-41页 |
| 2.5 突变前Mhp/P216基因与pMD18-T载体的连接 | 第41页 |
| 2.6 连接产物的转化 | 第41页 |
| 2.7 重组质粒DNA的提取、鉴定及测序 | 第41-42页 |
| 2.8 Mhp/P216基因的的突变 | 第42-46页 |
| 2.9 突变后Mhp/P216基因的回收纯化与测序 | 第46页 |
| 2.10 原核表达载体pET-32a(+)/P216的构建 | 第46-47页 |
| 2.11 连接产物的转化、重组质粒DNA的提取及鉴定 | 第47-48页 |
| 2.12 重组质粒的诱导表达及SDS-PAGE检测 | 第48页 |
| 2.13 最佳诱导条件的确定 | 第48-49页 |
| 2.14 融合蛋白的纯化 | 第49-50页 |
| 2.15 表达产物的Western-blot检测 | 第50页 |
| 3 结果与分析 | 第50-57页 |
| 3.1 Mhp/P216基因(突变前)的扩增 | 第50页 |
| 3.2 重组质粒pMD18-T/P216(突变前)的鉴定 | 第50-51页 |
| 3.3 猪肺炎支原体P216基因的突变结果 | 第51-53页 |
| 3.4 重组质粒pET-32a(+)/P216的鉴定 | 第53-54页 |
| 3.5 重组蛋白的SDS-PAGE结果 | 第54页 |
| 3.6 重组蛋白的存在状态分析 | 第54-55页 |
| 3.7 重组蛋白的表达条件的优化 | 第55-56页 |
| 3.8 重组蛋白的纯化结果 | 第56页 |
| 3.9 重组蛋白的免疫印迹分析 | 第56-57页 |
| 4 讨论 | 第57-58页 |
| 小结 | 第58-60页 |
| 第三章 P159、P216蛋白抗原片段黏附活性的研究 | 第60-67页 |
| 1 材料 | 第60-61页 |
| 1.1 菌株 | 第60页 |
| 1.2 主要试剂 | 第60页 |
| 1.3 主要仪器 | 第60页 |
| 1.4 主要溶液配方 | 第60-61页 |
| 2 方法 | 第61-63页 |
| 2.1 猪肺炎支原体232株的培养 | 第61页 |
| 2.2 SJPL细胞的培养 | 第61页 |
| 2.3 纤毛受体蛋白与P15P、P216蛋白抗原片段的微量滴定板试验 | 第61-62页 |
| 2.4 Mhp232株与SJPL细胞的黏附试验 | 第62页 |
| 2.5 P159、P216蛋白抗原片段对黏附抑制试验 | 第62-63页 |
| 3 结果与分析 | 第63-65页 |
| 3.1 微量滴定板试验结果 | 第63页 |
| 3.2 Mhp232株与SJPL细胞的黏附试验 | 第63-64页 |
| 3.3 Mhp/P159、Mhp/P216蛋白抗原片段黏附抑制试验结果 | 第64-65页 |
| 4 讨论 | 第65页 |
| 小结 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-70页 |
| 全文总结 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
